IDEHU 05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterizaci¨®n del fragmento N-terminal del dominio intracelular de la prote¨ªna IA2
Autor/es:
SICA, MAURICIO P.; TORCHIO, GABRIELA M.; PRIMO, MAR¨ªA EVANGELINA; ERM¨¢CORA, MARIO R
Lugar:
La Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXVII Reuni¨®n Anual de la Sociedad Argentina de Biof¨ªsica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biof¨¬sica
Resumen:
La prote¨ªna IA2 se encuentra en la membrana de los gr¨¢nulos de secresi¨®n de las c¨¦lulas beta pancre¨¢ticas. A trav¨¦s de su dominio intracelular (IA2ic), est¨¢ involucrada en varios mecanismos de regulaci¨®n de la secreci¨®n insul¨ªnica. Estudios recientes sugieren que el fragmento N terminal de este dominio interact¨²a con el dominio PDZ de beta 2 sintrofina para inmuovilizar las reservas de gr¨¢nulos secretorios de insulina. El aumento de la glucemia provoca la disociaci¨®n del complejo y la liberaci¨®n de los gr¨¢nulos. El modo de interacci¨®n de IA2ic con ¦Â 2 sintrofina no se conoce y presentar¨ªa ciertas particularidades, ya que com¨²nmente los ligandos de PDZ consisten en secuencias ubicadas en extremos C. Nuestro objetivo es caracterizar el fragmento N terminal de IA2ic (amino¨¢cidos 604-690; IA2604-690). Para ello, se subclon¨® su gen en un vector pET y se expres¨® la prote¨ªna en E coli. El fragmento IA2604-690 se purific¨® por HPLC fase reversa con >95% pureza. Los an¨¢lisis de derivada cuarta de los espectros de absorbancia sugieren que, en condiciones nativas, el ¨²nico triptofano de la prote¨ªna se encuentra excluido del solvente. Los ensayos de digesti¨®n controlada demostraron que IA2604-690 es resistente a la tripsina en condiciones nativas. Por otro lado, en condiciones nativas, este residuo se encuentra en la cercan¨ªa de un grupo que apaga su fluorescencia a valores de pH menores que 7.0. Por otro lado, la prote¨ªna forma un puente disulfuro que tambi¨¦n contribuye a modificar la emisi¨®n de fluorescencia. Todo esto nos lleva a la conclusi¨®n de que el fragmento IA2604-690 es un dominio aut¨®nomo de plegado. La caracterizaci¨®n de este dominio es sumamente importante para enternder su modo de interacci¨®n con el dominio PDZ de la prote¨ªna ¦Â 2 sintrofina y su impotancia en la regulaci¨®n de la movilizaci¨®n de las reservas de insulina.
