IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudios estructurales del dominio SEA del homólogo murino del antígeno CA125
Autor/es:
MARTIN E. NOGUERA; MARÍA E. PRIMO; LAURA N. F. SOSA; MARIO R. ERMÁCORA
Lugar:
La Plata, Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
El antígeno humano CA125, codificado por el gen MUC16, es una proteína de membrana ampliamente utilizada como marcador de cáncer de ovario[1]. Posee una región extracelular altamente O-glicosilada, con numerosas repeticiones de dominios SEA. El homólogo murino de MUC16 tiene un solo dominio SEA, cuya estructura se determinó mediante técnicas de RMN[2]. Los dominios SEA comprenden aproximadamente 120 residuos y se encuentran siempre en la región extracelular de proteínas, en general, altamente glicosiladas, pero su función exacta se desconoce. Muchos miembros de esta familia sufren tempranamente un corte proteolítico luego de su biosíntesis, y las subunidades generadas permanecen asociadas como un heterodímero en la superficie celular, por lo que se ha propuesto que los dominios SEA cumplen un rol en procesos de señalización acoplados a la disociación del heterodímero[3]. Para investigar la base estructural de este fenómeno de proteólisis, se expresó el dominio SEA del homólogo murino de MUC16 (MUC16SEA) recombinante en E. coli y se purificó por IMAC e intercambio iónico. Mediante este protocolo, la proteína se obtuvo con sus residuos de cisteína reducidos, aunque sólo accesibles al reactivo DTNB en condiciones desnaturalizantes. La estructura es muy estable contra la desnaturalización térmica, por dicroísmo circular a 220 nm se determinó una TM de aproximadamente 75 °C. Para explorar la flexibilidad conformacional de MUC16SEA, se hicieron experimentos de proteólisis controlada con tripsina, que revelaron un único sitio de corte. En experimentos donde se incubó MUC16SEA altamente purificada, se observó la acumulación de un producto de proteólisis de 14 KDa, muy resistente a la degradación posterior. Así, MUC16SEA es altamente termoestable y es proteolisada in vitro, dos características fuertemente asociadas en otros dominios SEA que se han caracterizado en detalle.