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T. gondii es un protozoario que infecta al hospedador mediante la ingestión oral de quistes tisulares u ooquistes induciendo una fuerte respuesta inmune tipo Th1 y confiere inmunidad contra una re-infección. Los oligodeoxinucleótidos sintéticos conteniendo motivos CpG (ODN-CpG) son capaces de promover respuestas Th1, necesarias para el diseño de vacunas contra patógenos intracelulares. Previamente demostramos que el antígeno recombinante ROP2 de T. gondii con ODN-CpG (R+C) genera una respuesta humoral y celular Th1 que resulta en protección contra la infección. En este trabajo, se evaluó la capacidad del antígeno recombinante GRA4 (G+C) de T. gondii y de ROP2+GRA4 (RG+C) combinados con ODN-CpG en conferir protección frente a la infección. Ratones C3H/HeN se inmunizaron con 3 inoculaciones im y como grupo control se inmunizaron ratones con PBS+CpG. Todos los grupos de ratones inmunizados mostraron altos niveles de anticuerpos específicos medidos por ELISA directo, con un perfil asociado a un tipo de respuesta Th1. La vacunación con G+C indujo una relación de anticuerpos IgG2a/IgG1 específicos contra GRA4 similar a la observada cuando se utilizó RG+C (7.89±2.74 vs 5.79±0.68 [X±SD] respectivamente,), mientras que la inmunización con RG+C potenció la respuesta Th1 contra ROP2 (R+C: 2.46±0.56 vs RG+C: 5.9±2.4, p<0.01). Los sobrenadantes de los esplenocitos de ratones inmunizados con G+C presentaron un aumento significativo comparado con el grupo control en los niveles de IFN-γ (723±110 vs 305±63 [X±SEM], respectivamente, p<0.05), IL-10 (187±17 vs 72±30, p<0.05) e IL-4 (125±12 vs 15±4, p<0.01) luego de la estimulación con el antígeno. Catorce días luego del último refuerzo, los ratones se desafiaron por vía oral con quistes de la cepa Me49 y se midió el nivel de protección conferido mediante el conteo de quistes en cerebro: 1321±377 (R+C), 1596±270 (G+C), 1558±369 (RG+C) p<0.05 vs control (2334±778). La utilización de ODN-CpG como adyuvante combinado con las proteínas recombinantes ROP2 y GRA4 indujo una protección significativa frente a la infección con T. gondii. La mezcla de ambos antígenos no aumentó el nivel de protección con respecto a los antígenos individuales. Para ambos antígenos, la respuesta inmune humoral y celular asociada fue del tipo Th1. Estos resultados indican que la combinación de los ODN-CpG con proteínas recombinantes de T. gondii sería una buena herramienta para ser utilizada en el desarrollo de una vacuna contra la toxoplasmosis.