Caracterización y localización de proteínas que reconocen peptidoglicanos (PGRPs

MC DE MARZI; B GANEM,; MM FERNÁNDEZ; AB BAUER; Q WANG; S CHO; RA MARIUZZA; MALCHIODI

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LII Reunión Anual de la SAIC - LV Reunión Anual de la SAI. Sociedad Argentina de Fisiología; 2007

as PGRPs son receptores de PAMPs capaces de reconocer peptidoglicanos (PGN). Poco se sabe sobre su localización y los mecanismos en los que están involucradas. PGRP-S de ratón actuaría en la destrucción intracelular de bacterias por PMNs, mientras que PGRP-L es capaz de  hidrolizar a los PGNs. Con el fin de detectar las PGRPs en muestras humanas y estudiar su rol biológico construimos plásmidos que codifican para las 4 PGRP (PGRP-S, -Ia, -Iβ y -L). Expresamos, replegamos in vitro y purificamos PGRP-S e -Ia; y obtuvimos antisueros policlonales especifícos para ambas moléculas. Mediante inmunoprecipitación e immunoblotting, detectamos la presencia de dímeros de PGRP-S en suero y saliva. Comprobamos la existencia de PGRP-S en PMN humanos y, mediante ensayos de inducción de la degranulación, observamos que se secretaba un dímero formado por la oxidación de Cys libres en la superficie del monómero. Se postula que las PGRPs solubles son bactericidas y actuarían como conectores uniendo PGN y algún receptor para la inducción de señales intracelulares. Para estudiar la presencia de esos receptores en células mononucleares se realizó Citometría de flujo agregando PGRP-S e Iα a linfocitos y monocitos de sangre periférica y de cultivo, y detectando su unión con los Acs específicos. Se observó un incremento en la intensidad media de fluorescencia en linfocitos de 1.74 y 4.08 veces, y en monocitos de 1.66 y 2.11 veces para PGRP-S e Iα, respectivamente. Por Immunoblotting y realizando ensayos de unión en presencia de glutaraldehído, se observó que PGRP-S coprecipitaba con una molécula proveniente de los monocitos de ~10 kDa. Basándonos en lo descrito podemos concluir que PGRP-S humana sería un dímero natural que es expresado en PMN como una proteína de 45 kDa, que es secretada al medio cuando el PMN degranula. Los resultados preliminares sugieren que PGRPs reconocería un receptor en la superficie celular de los monocitos.