Un método sencillo para dosaje de globotriaosilceramida en sedimento urinario de pacientes con enfermedad de Fabry

ROZENFELD P,; DE FRANCESCO PN,; CARLOS ALBERTO FOSSATI

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología y LII Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

La enfermedad de Fabry es un desorden genético ligado al X, causado por la deficiencia de la enzima lisosomal alfa-galactosidasa-A, que produce la acumulación de globotriaosilceramida (Gb3) en lisosomas. En la actualidad, el tratamiento especifico consiste en el reemplazo enzimático (ERT). La determinación de Gb3 en sedimento urinario es uno de los marcadores para evaluar severidad, progresión y tratamiento de la enfermedad. El objetivo es desarrollar un método sencillo de cuantificación de Gb3 en el sedimento urinario de pacientes con Enfermedad de Fabry y evaluar su utilidad para seguimiento del tratamiento. Se incluyeron 15 hemizigotas y 21 heterozigotas, la mitad de los cuales se encontraban en ERT. Alícuotas de 200 ml de orinas de 24 horas recolectadas por los pacientes y 10 controles sanos fueron centrifugadas. Los glicol hipidos presentes en el sedimento urinario fueron extraidos con cloroformo- metanol, sometidos a una digestión alcalina, e incubados con alfa-galactosidasa A recombinante. La cantidad de galactosa producida por la reacción enzimático sobre el Gb3 fue dosada por fluorometría. El resultado se expreso en nmoles de Gb3/orina de 24hs. Los valores de Gb3 determinados en las muestras de hemizigotas (723,03+488,69) y heterozigotas (231,56+102,93) fueron significativamente elevados (p=0,03 y p=0,01, respectivamente) con respecto a los de los controles (74,28+63,03). La cantidad de Gb3 en hemizigotas y heterozigotas en ERT (183,32+134,36 y 72,03+31,33, respectivamente) es significativamente menor que en los pacientes no tratados (p=0,005), mientras que no se observa diferencia significativa con los CN (p=0,15). Este sencillo método de dosaje de Gb3 resulta en una medida sensible y específica para el dosaje de Gb3 en muestras de pacientes con Enfermedad de Fabry. También demostró ser de utilidad para el seguimiento de la terapia de reemplazo enzimático, mostrando la reducción de los niveles de Gb3, a valores dentro del intervalo de referencia normal.