IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
SINERGISMO ENTRE TRIÓXIDO DE ARSÉNICO Y MG132 CON BAJAS DOSIS DE ÁCIDO VALPROICO Y VINCRISTINA
Autor/es:
KORNBLIHTT L; LOMBARDO T; CAVALIERE V; ALVAREZ E; BLANCO G
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Actas del 15° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clinicas; 2014
Institución organizadora:
Hospital de Clinicas
Resumen:
INTRODUCCIÓN El trióxido de arsénico (ATO) tiene poca eficacia como monodroga en el tratamiento de las neoplasias excepto en la leucemia promielocítica, pero combinada con otras drogas puede aumentar su potencia y reducir su toxicidad. El estudio de la interacción de drogas citotóxicas contribuye al diseño de combinaciones terapéuticas eficientes contra blancos moleculares. El cálculo del índice de combinación (CI) permite cuantificar y clasificar la interacción de las drogas como sinérgicas (CI1) o aditivas (CI=1) dentro del amplio rango de efecto citotóxico (0-100%). ATO y MG132, un inhibidor del proteosoma con actividad simil-quimiotripsina como el bortezomib, son antagónicas en las células Raji (línea celular correspondiente al linfoma de Burkitt). OBJETIVO Cambiar la interacción antagónica entre ATO y MG132 e inducir sinergismo mediante la incorporación de dosis subcitotóxicas de 2 drogas: ácido valproico (VPA) que actúa sobre la histona deacetilasa (HDAC), y la vincristina (VCR) que interfiere con la red de microtúbulos. VPA aumenta la concentración de BNIP3, un miembro de la flia de Bcl2 que está silenciado en varias neoplasias hematológicas y tiene un efecto controvertido de autofagia y muerte celular. MATERIALES Y MÉTODOS El estudio se desarrolló en la línea celular Raji expuesta a un amplio rango de dosis de ATO y MG132 por 24 hs o 72 hs con o sin VPA y/o VCR. La citotoxicidad se estudió mediante el uso de un citómetro de flujo de 8 canales, la interacción de drogas se calculó mediante el método de Chou-Talay, la autofagia se evaluó con monodancil-cadaverina (MDC) bajo excitación de luz UV en el citómetro de flujo, la distribución de las mitocondrias se observó con mitotracker rojo en microscopio de fluorescencia y la expresión de BNIP3 se evaluó con microscopio de fluorescencia y RT-PCR. RESULTADOS En la línea celular Raji, la adición de dosis subcitotóxicas de VPA (3mM) aumentó el antagonismo entre ATO y MG132 (CI>1.91 vs CI> 1.16 sin VPA), incrementó la autofagia e indujo una distribución de las mitocondrias entorno al núcleo. El tratamiento con VPA indujo expresión de ARNm y proteína BNIP3 pero no modificó el antagonismo ATO+MG132 La adición de dosis subcitotóxicas de VCR (1M) bloqueó la autofagia con respecto a los niveles basales y suprimió la distribución perinuclear de la mitocondrias pero no modificó el antagonismo ni indujo expresión de BNIP3. La adición de dosis subcitotóxicas de VPA y de VCR cambió la interacción de ATO y MG132 de antagonismo a sinergismo (CI=0.7 < 1), acompañada del descenso de la autofagia por debajo de los niveles basales, supresión de la distribución perinuclear de las mitocondrias y un aumento en la expresión de BNIP3 (proteína y RNA) CONCLUSIONES En la línea celular correspondiente al linfoma de Burkitt, el sinergismo entre ATO y MG132 se logró incidiendo simultáneamente sobre la HDAC y la red de microtúbulos. La sensibilización se correlacionó con la mayor expresión de BNIP3, la inhibición de la autofagia y el cambio en la distribución citoplásmatica de las mitocondrias