Desarrollo de un inmunoensayo por citometría de flujo para la detección de Autoanticuerpos Anti-glutamato Decarboxilasa

GUERRA L.L., FACCINETTI N.I., TRABUCCHI A., IACONO R.F., POSKUS E., VALDEZ S.N.

Cancún

Congreso; XV Congreso de la Asociación Latinoamericana de Diabetes; 2013

Asociación Latinoamericana de Diabetes

Los autoanticuerpos anti-glutamato decarboxilasa (GADA) están presentes en las formas autoinmune de Diabetes Mellitus, mucho tiempo antes de la aparición de los síntomas clínicos. El método de referencia para su detección es el ensayo de unión de radioligando (RBA). El objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un inmunoensayo sensible por Citometría de Flujo basado en microesferas para la semi-cuantificación de GADA: Flow Cytometric Microsphere-based ImmunoAssay (FloCMIA). Se emplearon 46 sueros humanos del Servicio Inmunoanalítico de apoyo a la Diabetes (STAN-CONICET), 40 sueros de niños y adolescentes con reciente diagnóstico de DM tipo 1 (DMT1) y 40 sueros humanos normales (SHN), los cuales fueron analizados en paralelo por RBA, ELISA y FloCMIA. Para este último, se emplearon microesferas (4 μm, poliestireno) adsorbidas con Glutamato decarboxilasa fusionada a Tiorredoxina (TrxGAD) como fase sólida. La detección se fundamentó en la unión de GADA a microesfera-TrxGAD y a TrxGAD-biotina, evidenciando al inmunocomplejo con estreptavidina-DTAF. Los resultados se expresaron en Unidades de desvío estándar (SDs). Flow Cytometric Microsphere-based ImmunoAssay (FloCMIA). Se emplearon 46 sueros humanos del Servicio Inmunoanalítico de apoyo a la Diabetes (STAN-CONICET), 40 sueros de niños y adolescentes con reciente diagnóstico de DM tipo 1 (DMT1) y 40 sueros humanos normales (SHN), los cuales fueron analizados en paralelo por RBA, ELISA y FloCMIA. Para este último, se emplearon microesferas (4 μm, poliestireno) adsorbidas con Glutamato decarboxilasa fusionada a Tiorredoxina (TrxGAD) como fase sólida. La detección se fundamentó en la unión de GADA a microesfera-TrxGAD y a TrxGAD-biotina, evidenciando al inmunocomplejo con estreptavidina-DTAF. Los resultados se expresaron en Unidades de desvío estándar (SDs). Resultados: Población Parámetro Ensayo RBA ELISA FloCMIA SHN Especificidad (%)(a) (a) 100 100 97,8 STAN- Mediana (SDs) 47,86 5,02 23,6 CONICET Rango (SDs) 9,06-67,99 (-1,25)-10,30 1,00-134,40 Sensibilidad (%)(b) (b) 100 69,6 97,4 DMT1 Mediana (SDs) 17,37 0,99 2,38 Rango (SDs) (-0,41)-64,76 (-1,18)-12,25 (-1,49)-152,10 Sensibilidad (%)(b) (b) 100 58,6 58,6 Prevalencia (%)(c) 72,5 42,5 47,5