valproico (VPA), droga epigenética que induce autofagia y protege a las células de linfoma de Burkitt (LB) de la muerte inducida por hipoxia

KORNBLIHTT, L; LOMBARDO, T; CAVALIERE, V; COSTANTINO, S; ALVAREZ, E; BLANCO, G

Congreso; XXI Congreso Argentino de Hematología, Sociedad Argentina de Hematología; 2013

La autofagia es un proceso de autoeliminación de organelas intracelulares mediante autofagosomas que luego se unen a los lisosomas. En neoplasias, su rol es controvertido ya que puede promover tanto sobrevida como muerte celular. La microscopía de fluorescencia (MF) permite el estudio simultáneo de autofagia y muerte, pero la cuantificación es limitada. La monodancylcadaverina (MDC), sonda fluorescente azul excitable con luz UV, permite detectar y cuantificar autofagosomas por citometría de flujo (CF). Evaluamos el efecto del VPA en células de LB (Raji) en normoxia e hipoxia. Método Las células LB se incubaron a 37°C en normoxia e hipoxia (atmósfera <0.1%O2 introduciendo una mezcla 95%N 5%CO2 en cámara MIC-101 mediante flow meter dual) y se marcaron con MDC, ioduro de propidio (PI) y diacetato de fluoresceína (FDA). Mediante CF de láser dual, los autofagosomas se detectaron por excitación UV y emisión de fluorescencia azul, mientras que la muerte celular se detectó por excitación con láser azul y emisión de fluorescencia verde (FDA) y roja (PI). Además se evaluó por microscopía de fluorescencia (MF) para correlacionar con criterios morfológicos. Resultados La MF mostró un rango continuo de fluorescencia entre MDC- y MDC+. Por CF, el 20% de las células sin tratar fueron MDC+. Rapamicina, inductor de autofagia, aumentó este porcentaje en forma dosis dependiente (19,4/26,7/45,8/55,8/63,4% con 0,25/0,5/1/2/3 uM respectivamente). En normoxia, VPA a dosis subcitotóxicas (<4mM) indujo un incremento dosis dependiente de células MDC+. A dosis mayores, la muerte celular aumentó progresivamente siendo 6.22 mM el efecto letal (DL) 50% y 8mM el DL 90%. Con dosis de VPA > DL30%, la autofagia disminuyó progresivamente. En hipoxia, más del 97% de las células LB sin tratar murieron a las 72 horas. Pero, tratadas con VPA 8mM la sobrevida se incrementó a un 53% y más del 50% de estas células fueron MDC+ por CF indicando la presencia de autofagia. Conclusión La CFM de células LB marcadas con MDC/FDA/PI y tratadas con VPA demostró una relación inversa entre autofagia y muerte celular. VPA impidió la muerte por hipoxia de las células LB, efecto que se asoció al aumento de autofagia