Inhibición del cluster perinuclear mitocondrial (CPNM) y de la autofagia por vincristina (VCR) en células del linfoma de Burkitt (LB): su uso potencial para sensibilización a drogas citotóxicas

KORNBLIHTT, L; CAVALIERE, V; LOMBARDO, T; COSTANTINO, S; ALVAREZ, E; BLANCO, G

Congreso; XXI Congreso Argentino de Hematología, Sociedad Argentina de Hematología; 2013

Las células tumorales recurren a la autofagia como una vía de resistencia a la muerte inducida por fármacos. Se conocen varios mecanismos dependientes de la autofagia que mejoran la sobrevida tumoral. Entre ellos, la eliminación de las mitocondrias (mitofagia) sería responsable de la resistencia a fármacos que producen apoptosis por vía mitocondrial. En algunas células neoplásicas, las mitocondrias son transportadas hacia la zona perinuclear para ser eliminadas por autofagia.             En este trabajo, buscamos identificar autofagia basal y presencia de CPNM en células LB (Raji) y en leucemia promonocítica (U937) y evaluar el efecto de (VCR) sobre los CPNM, como inhibidora de la red de microtúbulos.                                                                                                                       La masa mitocondrial se evaluó con sonda mito-tracker roja (SMTR), la distribución de mitocondrias polarizadas con tetrametilrodamina-éster (TMRE) (ambas c/microscopio de fluorescencia) y la autofagia por tinción de autofagosomas con monodancilcadaverina (MDC) que por excitación UV emiten fluorescencia azul (citómetro de flujo).                                                                                         Drogas utilizadas: rapamicina 0.25 a 2uM (inhibidor mTOR, inductor de autofagia), VCR 1uM (inhibidor de MT), trióxido de arsénico (ATO) 1-3uM (subcitotóxica) y 5-15uM (citotóxica) , ácido valproico (VPA)1-4mM (subcitotóxica) y 5 -8mM (citotóxica) (inbhibidor de HDAC)                                               Las células LB,en condiciones basales, mostraron autofagosomas prominentes y más de un 20% se detectó como positivas (citometría de flujo). Los niveles basales se incrementaron con Rapamicina hasta un 70% a las 24hs.                                                                                                                           El flujo autofágico se bloqueó al incubar 2 hs con VCR. ATO y VPA, a dosis subcitotóxicas, incrementaron la autofagia pero, a dosis citotóxicas, la disminuyeron (> 40%) a las 72hs.                        Identificamos la presencia de CPNM en la línea Raji pero no en la línea U937 (tinción SMTR y TMRE). VPA aumentó la definición del CPNM mientras que VCR alteró por completo el CPNM creando una distribución subcelular citoplasmática muy similar a las células U937 en condiciones basales.                                                                                                                                                Concluimos que la VCR, en dosis subcitotóxicas, tiene como blanco molecular el CPNM, bloqueando la mitofagia y siendo un potencial agente sensibilizante de LB a drogas citotóxicas que inducen apoptosis por vía mitocondrial