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Detección de serología positiva contra antígenos vacunales utilizando anticuerpos marcados con el colorante RBV5RDarío Errico, Martín Ledesma, Juliana Leoni, Alejandro Ferrari Instituto de Estudios de la Inmunidad humoral (IDEHU ? Conicet - UBA) Cátedra de Inmunología, Fac. Farmacia y Bioquímica (UBA)Los ensayos de inmunodiagnóstico rápido utilizan como método de detección proteínas marcadas con oro coloidal. El principal inconveniente de esta estrategia es su elevado costo. Con la necesidad de desarrollar técnicas inmunodiagnósticas de uso veterinario, hemos optimizado la marcación de anticuerpos con colorantes reactivos. Así, estos anticuerpos podrían proporcionar adecuada sensibilidad y bajo costo en ensayos de dot blot. El objetivo del trabajo fue diseñar y optimizar un ensayo de dot blot de detección de serología contra antígenos vacunales (vacuna antirrábica) en Camélidos Sudamericanos, utilizando anticuerpos marcados con el colorante violeta RBV5R. Se analizaron: el soporte de pegado, la membrana, el mecanismo de pegado del antígeno, el sistema de siembra y la inactivación del colorante libre, así como el tiempo de incubación y las condiciones de lavado. Los resultados muestran que el poliestireno de alto impacto funcionó adecuadamente como soporte, que la nitrocelulosa fue la membrana óptima y que la cinta doble faz 3M fue un adecuado método de pegado. La siembra utilizando con equipo de microfiltración presentó mejor reproducibilidad y visualización con respecto a la siembra manual. El tiempo de incubación óptimo fue de 60 minutos, y el agregado de un bloqueante (BSA 1% + tween 20 0.1 %) en combinación con lavados con PBS/tween 20 0,1%, redujeron la coloración de fondo. Se concluye que el sistema de detección basado en RBV5R es aplicable en ensayos de dot blot, y que la calidad del anticuerpo a marcar es crucial para tener una adecuada sensibilidad y reproducibilidad.