Ligandos de CD44 inhiben la inducción de autofagia y sensibilizan a la muerte celular mediada por gemcitabina en tumores pancre¨¢ticos

SIMUNOVICH T. C.; PAPADEMETRIO D. L.; LOMPARDÍA S. L.; COSTANTINO S.; LOMBARDO T.; CAVALIERE V.; ÁLVAREZ É.

Mar del Plata

Congreso; Reuni¨®n Anual de la Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica; 2012

SAIC

Los tumores de p¨¢ncreas son altamente agresivos y resistentes a la quimioterapia. La gemcitabina (Gem), actual agente terap¨¦utico, no logra incrementar la sobrevida. CD44 es el principal receptor del ¨¢cido hialur¨®nico (AH), componente mayoritario de la matriz extracelular, y de sus productos de degradaci¨®n (oAH). En tumores s¨®lidos se ha asociado la expresi¨®n de CD44 a un fenotipo agresivo con capacidad de progresi¨®n y met¨¢stasis. El objetivo fue evaluar la respuesta de la l¨ªnea celular MIAPaCa-2 a los efectos de AH y oAH en relaci¨®n con sobrevida celular, inducci¨®n de autofagia y sensibilizaci¨®n a la muerte inducida por Gem. Por CF se verific¨® la expresi¨®n basal de CD44 siendo de 75,9¡À3,1%. Por incorporaci¨®n de 3HT se evalu¨® la proliferaci¨®n celular inducida por AH a 24 y 48h, encontr¨¢ndose un incremento de 30 y 37% (300¦Ìg/ml) y 40 y 47% (500¦Ìg/ml) (p<0,05). Dicho efecto fue anulado por bloqueo con un mAb anti-CD44 (p<0,01).oAH no mostr¨® efecto significativo sobre la proliferaci¨®n. Por WB se encontr¨® que el AH increment¨® la relaci¨®n Akt/Akt y la expresi¨®n de ciclina D1 (p<0,01), mientras oAH gener¨® disminuci¨®n en ambos casos (p<0,05). AH y oAH inhibieron la autofagia, observ¨¢ndose una disminuci¨®n de LC3-II (p<0,01) y de la relaci¨®n Beclin/Bcl-xl (p<0,05). Estos resultados se correlacionaron con las im¨¢genes post-transfecci¨®n con RFP-LC3. Dado que los ligandos de CD44 inhiben la autofagia, se decidi¨® evaluar si al combinarlos con Gem se sensibilizaba la muerte celular. Se evalu¨® por CF la inducci¨®n de muerte (FDA/IP) a 48 y 72 h; MIAPaCa-2 al ser tratada con Gem 1000¦Ìg/ml present¨® 31 y 44% de muerte (IP+) (p<0,001). El pretratamiento de las c¨¦lulas con AH 300¦Ìg/ml, mostr¨® un 50 y 58% de muerte respectivamente (p<0,01) y con oAH 300¦Ìg/ml, 50 y 64% (p<0,01). Resultados similares se obtuvieron por la t¨¦cnica de TUNEL. Se concluye que la inhibici¨®n de la autofagia por HA o por oHA sensibiliza a las c¨¦lulas a la acci¨®n citot¨®xica de la Gem.3HT se evalu¨® la proliferaci¨®n celular inducida por AH a 24 y 48h, encontr¨¢ndose un incremento de 30 y 37% (300¦Ìg/ml) y 40 y 47% (500¦Ìg/ml) (p<0,05). Dicho efecto fue anulado por bloqueo con un mAb anti-CD44 (p<0,01).oAH no mostr¨® efecto significativo sobre la proliferaci¨®n. Por WB se encontr¨® que el AH increment¨® la relaci¨®n Akt/Akt y la expresi¨®n de ciclina D1 (p<0,01), mientras oAH gener¨® disminuci¨®n en ambos casos (p<0,05). AH y oAH inhibieron la autofagia, observ¨¢ndose una disminuci¨®n de LC3-II (p<0,01) y de la relaci¨®n Beclin/Bcl-xl (p<0,05). Estos resultados se correlacionaron con las im¨¢genes post-transfecci¨®n con RFP-LC3. Dado que los ligandos de CD44 inhiben la autofagia, se decidi¨® evaluar si al combinarlos con Gem se sensibilizaba la muerte celular. Se evalu¨® por CF la inducci¨®n de muerte (FDA/IP) a 48 y 72 h; MIAPaCa-2 al ser tratada con Gem 1000¦Ìg/ml present¨® 31 y 44% de muerte (IP+) (p<0,001). El pretratamiento de las c¨¦lulas con AH 300¦Ìg/ml, mostr¨® un 50 y 58% de muerte respectivamente (p<0,01) y con oAH 300¦Ìg/ml, 50 y 64% (p<0,01). Resultados similares se obtuvieron por la t¨¦cnica de TUNEL. Se concluye que la inhibici¨®n de la autofagia por HA o por oHA sensibiliza a las c¨¦lulas a la acci¨®n citot¨®xica de la Gem.