Ligandos de CD44 bloquean la inducción de autofagia y sensibilizan a la muerte celular inducida por gemcitabina en tumores de páncreas.

SIMUNOVICH T.; PAPADEMETRIO D.; LOMPARDIA S.; COSTANTINO S.; LOMBARDO T.; CAVALIERE V.; ALVAREZ E

Otro; LVII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica – LX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2012

SAIC-SAI

  Ligandos de CD44 bloquean la inducción de autofagia y sensibilizan a la muerte celular inducida por Gemcitabina en tumores de páncreas.   Los tumores de páncreas son altamente agresivos y resistentes a la quimioterapia. La gemcitabina (Gem), actual agente terapéutico, no logra incrementar la sobrevida. CD44 es el principal receptor del ácido hialurónico (AH), componente mayoritario de la matriz extracelular, y de sus productos de degradación (oAH). En tumores sólidos se ha asociado la expresión de CD44 a un fenotipo  agresivo con capacidad de progresión y metástasis. El objetivo fue evaluar la respuesta de la línea celular MIAPaCa-2 a los efectos de AH y oAH en relación con sobrevida celular, inducción de autofagia y sensibilización a la muerte inducida por Gem. Por CF se verificó la expresión basal de CD44 siendo de 75,9±3,1%. Por incorporación de 3H-T se evaluó la proliferación celular inducida por AH a 24 y 48h, encontrándose un incremento de 30 y 37% (300µg/ml) y 40 y 47% (500µg/ml) (p<0,05). Dicho efecto fue anulado por bloqueo con un mAb anti-CD44 (p<0,01).oAH no mostró efecto significativo sobre la proliferación. Por WB se encontró que el AH incrementó la relación pAkt/Akt y la expresión de ciclina D1 (p<0,01), mientras oAH generó disminución en ambos casos (p<0,05). AH y oAH inhibieron la autofagia, observándose una disminución de LC3-II (p<0,01) y de la relación Beclin/Bcl-xl (p<0,05). Estos resultados se correlacionaron con las imágenes post transfección con RFP-LC3. Dado que los ligandos de CD44 inhiben la autofagia, se decidió evaluar si al combinarlos con Gem se sensibilizaba la muerte celular. Se evaluó por CF la inducción de muerte (FDA/IP) a 48 y 72 h; MIAPaCa-2 al ser tratada con Gem 1000µg/ml presentó 31 y 44% de muerte (IP+) (p<0,001). El pretratamiento de las células con AH  300µg/ml, mostró un 50 y 58% de muerte respectivamente (p<0,01) y con oAH  300µg/ml, 50 y 64% (p<0,01). Resultados similares se obtuvieron por la técnica de TUNEL. Se concluye que la inhibición de la autofagia por HA o por oHA sensibiliza a las células a la acción citotóxica de la Gem. Palabras claves: CD44, tumores de páncreas, Gemcitabina,  autofagia, AH