?Chagasina como inmunomodulador en la infección por T.cruzi?

CERNY N; ALBA SOTO C; CAZORLA SI; GONZALEZ CAPPA SM; MALCHIODI EL

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de de Protozoología y Enfermedades Parasitaria.; 2011

Sociedad Argentina de de Protozoología y Enfermedades Parasitaria.

En la búsqueda de respuestas protectivas frente a la infección por T. cruzi, seleccionamos como blanco proteínas claves para la supervivencia del parásito y el desarrollo de la infección. Una de estas es la Chagasina (Chg), que es un inhibidor de proteasas que se uniría a cruzipaína (Cz), la principal cisteín proteasa del parásito e importante factor de virulencia. Chg se asocia a Cz durante su tráfico a compartimentos del parásito y su rol principal sería la regulación post-transcripcional de proteasas. En este trabajo analizamos in vitro la capacidad inmunoestimuladora de Chg recombinante (rChg) sobre CPA profesionales e in vivo su capacidad inmunoprotectiva como vacuna profiláctica o terapéutica. Macrófagos peritoneales de ratones Balb-c fueron cultivados con rChg por 24 hs observándose por FACS un aumento en la expresión de moléculas de CMH-II, respecto al grupo control (21.8 y 5.7%, respectivamente), que no se registró luego del cultivo con la proteína previamente desnaturalizada por calentamiento (7.4%). También medimos la producción de ON por medio de reacción colorimétrica con reactivo de Greiss. Observamos un aumento en los sobrenadantes (SN) de macrófagos cultivados en presencia de rChg (12.7 nM), pero no así con la proteína desnaturalizada (4.4 nM) o en su ausencia (2.9 nM). Se evaluó además, el efecto de rChg sobre CD derivadas de MO de ratones Balb/c TLR4-/-,  observándo  un aumento de CD80 en presencia de la rChg, respecto al grupo control (72.7 y 6.5%). Dicho aumento no se registró en presencia de rChg desnaturalizada (10.1%). En los SN se determinó 10 veces mayor producción de IL-10 e IL-12 en los estimulados con rChg que en los controles, frente al estímulo con rChg. Se inmunizaron y reestimularon a los 15 días ratones Balb/c con: GI: PBS+CpG y GII: rChg+CpG.  A los 15 días de la última inmunización los ratones fueron desafiados con 500 tripomastigotes por vía intradermoplantar. Un tercer grupo de ratones (GIII) fueron infectados y tratados los días 0 y 7 pi con rChg+CpG. Observamos una disminución en la parasitemia (área bajo la curva) en la fase aguda de la infección en los GII y GIII, respecto al grupo control (566, 245 y 699, respectivamente).  Esta protección también se vio reflejada en la fase crónica de la infección en menores niveles de enzimas séricas marcadoras de daño muscular. Esta disminución fue más importante en el GIII que presentó valores entre 3, 5 y 2 veces menores respecto al grupo control, para CK, LDH y ASAT, respectivamente. Estos resultados en conjunto avalarían a Chg como antígeno inmunoterapéutico para el control de la infección por T. cruzi. Su eficacia estaría relacionada con su capacidad para activar CPA.