Modulación por anticuerpos de la apoptosis de macrófagos bovinos infectados con Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis (Map) in vitro

JOLLY A; LOMPARDÍA S. L.; FERNANDEZ B.; COLAVECCHIA S.; HAJOS S. E.; MUNDO S.

Río Cuarto

Congreso; IV Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2011

Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria

La capacidad de las micobacterias de modular la apoptosis  constituye un factor de virulencia. La infección por Map en presencia de anticuerpos (Acs) específicos podría afectar esta capacidad. En estudios previos encontramos un efecto de los Acs bovinos  frente a lipoaraninomanano (LAM, antígeno inmunodominante de la pared celular micobacteriana) en la supervivencia de Map dentro de macrófagos in vitro. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la opsonización de Map con Acs provenientes de bovinos infectados con paratuberculosis (SI, n=2); vacunados con LAM (SL, n=2); o sanos, (SC, n=1) sobre la apoptosis de macrófagos in vitro. Se infectó macrófagos Bomac con Map ATCC19698, opsonizada con 10% de suero decomplementado (multiplicidad de infección 10:1, 2 h) y a las 24 h se evaluó la apoptosis mediante la tinción con Naranja de Acridina/Bromuro de Etidio (NA/BE) y observación al microscopio de fluorescencia, y la marcación con Anexina V/7-Acitnomicina (7-AAD) y análisis por citometría de flujo. Se realizaron 3 repeticiones del ensayo NA/BE y los resultados se analizaron estadísticamente por ANOVA y Test de Dunnett. Encontramos una tendencia al aumento de los porcentajes de apoptosis al infectar los macrófagos en presencia de Acs específicos (SI: 21,1±3,8; SL: 15,8±4,5; SC: 9,9±5,4), que resultó estadísticamente significativa sólo al opsonizar con Acs de infectados. En un ensayo revelado por citometría de flujo encontramos las mismas tendencias (SI: 39,1±5,4; SL: 29,2±1,1; SC: 25,5). Estos resultados preliminares sugieren que los anticuerpos específicos podrían modular el efecto de Map sobre la apoptosis de macrófagos in vitro.