IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
- Modulación de BNIP3 citoplasmático y nuclear durante la inducción de muerte celular por NaASO2 y MG132 en células leucémicas mieloides.
Autor/es:
CAVALIERE V.; LOMBARDO T; AMAYA L; COSTANTINO S.; ALVAREZ E.; BLANCO G.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Hematología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Hematología
Resumen:
BNIP3 es una proteína miembro de la familia Bcl-2 que induce muerte programada en algunos tumores por medio de su inserción en la membrana mitocondrial. Su localización nuclear, descripta en algunas neoplasias, se asocia a formas agresivas y resistentes a la quimioterapia. Objetivo: Evaluar la expresión basal y modulación de BNIP3, a nivel de proteína BNIP3p) y ARNm (BNIP3m), en células leucémicas luego de inducir la muerte celular por tratamiento individual y combinado con NaAsO2 y el inhibidor de proteasoma MG132, y el hipomentilante azacitidina como monodroga. Material y Métodos: El efecto citotóxico se estudió exponiendo las células en cultivo durante 72hs por triplicado en un rango de 7 dosis, con posterior tinción con ioduro de propidio y fluoresceína diacetato y evaluación por citometría de flujo. Se determinó el efecto citotóxico 90% (EC90) sobre cada línea celular (U937,leucemia promonocítica; K562, LMC y Raji, linfoma de Burkitt) y se expusieron las células a esta dosis durante 24h para luego obtener fracciones proteicas nucleares y citoplasmáticas por separado. La expresión y localización subcelular se determinó por western blot con anticuerpo monoclonal contra BNIP3. La expresión de BNIP3m se determinó por RT-PCR. Resultados: El BNIP3m fue detectable en U937 y K562 pero la línea Raji mostró niveles más bajos. Los tratamientos con EC90 no modificaron la expresión de BNIP3m en ningún caso pero sí el tratamiento con 5M azacitidina durante 24hs que aumentó sensiblemente su expresión. El BNIP3p basal fue detectado en las tres líneas pero sólo en la fracción nuclear. Con los tratamientos se observó la presencia de BNIP3p en la fracción citoplásmica y la desaparición en la fracción nuclear en células K562 y U937. En cambio, las células Raji no mostraron cambios en la expresión de BNIP3p nuclear con los tratamientos. Conclusiones: El BNIP3 tendría un rol en la inducción de muerte por tratamiento con AsNaO2 y MG132 en células leucémicas mieloides U937 y K562 pero no en células Raji. La falta de participación de BNIP3 en la inducción de muerte en células Raji se debería al silenciamiento epigenético reversible por el hipometilante.