Actividad tripanocida de imidazoisoquinolinonas tioamida-sustituidas.

FRANK F. M.; CICCARELLI A .B.; PUENTE V.; BRUNO A.; BATLLE A.; LOMBARDO M. E

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

Trypanosoma cruzi posee una serie de vías metabólicas, diferentes a las del huésped que pueden ser utilizadas como blancos terapeúticos. Simultáneamente, existen una variedad de productos naturales con actividad tripanocida . El Tryptantrin es un alcaloide aislado de una planta medicinal (Strobilanthes cusia), que presenta actividad antibacteriana y antiparasítica. A partir de la estructura del Tryptantrin se sintetizaron una serie de derivados (imidazoisoquinolinonas) que mostraron en epimastigotes actividad anti-T-cruzi. De estos compuestos seleccionamos cuatro, tres que presentan un grupo tioamida esencial para manifestar mayor actividad (designados C1, C2 y C3) y un cuarto compuesto sin este grupo funcional usado como control (D). Para los cuatro evaluamos actividad anti-T. cruzi in vitro sobre los tres estadíos del parásito y tratamos de caracterizar su modo de acción. Observamos para C1 los menores valores de IC50 independientemente del estadio (epi: 1,49±0,28μM, tripo: 34,89±1,20μM, amas: 1,74±0,30μM) y para D los más altos. C3 mostró valores similares a los de C1 para epi y amas pero alrededor de 7 veces mayor para tripo. C2 mostró menor actividad que C3. El benznidazol fue usado como droga de referencia (IC50 epi: 5,49±0,89μM y tripo: 30,26±2,85μM). Hasta concentración 300μM C1, C2 y C3 no mostraron citotoxicidad sobre células Vero. Por ciclovoltametría se evidenció la reducción irreversible de estos compuestos y picos de oxidación y reducción en presencia de glutatión. Considerando el carácter electrofílico de los mismos, sobre epimastigotes se evaluó el efecto de reductores como DTT (0,4-0,8μM) y ácido ascórbico (0,75-1,50μM), sobre la actividad inhibitoria de C1, observándose hasta un 100% de aumento. Con glutatión como reductor, a partir de 2,5 μM se observó pérdida completa de actividad inhibitoria (por formación del aducto C1-glutatión). El tratamiento con C1 no altera el estado oxidativo intracelular (evaluado con H2DCFDA), las actividades de superoxido dismutasa y ascorbato peróxidasa y el contenido total de tioles libres, pero si produce un aumento de hasta 250% de actividad de tripanotiona reductasa. Con DIOC6 y rodamina 123 detectamos despolarización de la membrana mitocondrial, con liberación de citocromo c desde la mitocondria al citoplasma (Western-blot). El tratamiento con C1 produce sobre el parásito muerte celular por apoptosis como indica además el ensayo con anexina V-FITC/ioduro de propidio. En conclusión las imidazoisoquinolinonas tioamida-sustituidas ensayadas mostraron una importante actividad anti-T. cruzi, que puede ser potenciada por la presencia de un reductor. En base a su carácter electrofílico estos compuestos podrían reducirse en el interior del parásito a expensas del poder reductor proporcionado por el pool de tioles de bajo peso molecular y el blanco principal para ejercer su acción tripanocida sería la mitocondria. La disfunción de esta organela sería el disparador de la muerte celular por apoptosis