MODELOS DE ALERGIA EXPERIMENTAL IN VIVO PARA EVALUAR PROPIEDADES INMUNOLOGICAS DE PRODUCTOS NATURALES

MALDONADO AM; CASTRO MS; CARIDDI LN; AZPIROZ MB; MOLINA MA; MOURELLE AC; ALANIZ FS; MANGHI MA

Buenos Aires

Congreso; XXXV Congreso Anual AAAeIC; 2012

Asociacion Argentina de Alergia e Inmunologia Clinica

INTRODUCCIÓN. La evaluación de la eficacia de un producto antialérgico e inmunomodulador se inicia con técnicas in vitro: desgranulación de mastocitos o basófilos e inhibición por el producto en estudio. En sobrenadantes de cultivos de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) estimuladas por el alérgeno o el producto, se miden niveles de Acs o citoquinas marcadores de sub-poblaciones celulares Demostrada la eficiencia in vitro, se continúa con modelos experimentales de alergia, para corroborar en ensayos in vivo los resultados obtenidos in vitro. Los modelos de anafilaxia cutánea activa/ pasiva (ACA/ACP) reproducen la reacción mediada por mastocitos y permiten evaluar los efectos de un producto sobre la reacción de hipersensibilidad de tipo 1. Hemos demostrado que la cepa probiótica, Enterococcus faecalis CECT7121 (Ef) y productos derivados de Minthostachys verticillata (Mv) fueron capaces de inhibir in vitro la desgranulación específica de basófilos aislados de pacientes alérgicos. OBJETIVOS. Evaluar in vivo la actividad antialérgica e inmunomoduladora de: a) Ef en un modelo de ACA, y b) de derivados vegetales de Mv: aceite esencial (ae), mentona(M), pulegona (P) y limoneno (L) en un modelo de ACP. METODOLOGÍA. Para la investigación del probiótico se inocularon vía intragástrica ratones hembras BALB/c con Ef antes y durante la inmunización SC empleando OVA como alérgeno. Se determinaron en sueros: IgE, IgG, IgG1 e IgG2a anti-OVA. Se analizó la respuesta Th1 por la producción de IFN-g e IL-2 en sobrenadantes de esplenocitos. La respuesta Th2 se determinó por la secreción de IL-4, IL-5 e IL-13. Luego de administrar Azul de Evans vía EV, a cada animal, se inoculó vía ID, OVA en una de las orejas y PBS en la otra, como control. Se observaron y compararon las reacciones de ACA en animales inmunizados con OVA y controles. Para evaluar los efectos de los derivados vegetales por ACP también se utilizaron ratones BALB/c hembras. Se inocularon en el dorso vía ID: IgE de ratón anti-DNP y a las 24h se desafiaron vía EV con DNP-BSA-Azul de Evans. Se inocularon 1h antes del desafío vía intraperitoneal con ae o cada monoterpeno: M, P o L, o Dexametasona o NaCl 0.9%. Se evaluó el área pigmentada de la piel dorsal de cada animal, extrayendo el tinte para la medición espectrofotométrica. RESULTADOS. Los animales del lote que recibieron Ef presentaron menores niveles de IgE-OVA y de síntesis de citoquinas Th2: IL-4, IL-5 e IL-13 que los controles, incrementaron los niveles de IgG2a-OVA y no variaron los niveles de IgG-OVA, IgG1-OVA, IL-10, IL-12 e IFN-g. No se detectaron Acs específicos en animales no inmunizados. Los ensayos de ACP mostraron que L inhibió la reacción alérgica más que ae (p