nducción de muerte celular con modulación de BNIP3 y autofagia por AsNaO2 y el inhibidor del proteosoma MG132 en células leucémicas mieloides y linfoides

CAVALIERE VICTORIA; LOMBARDO,TOMÁS; COSTANTINO, SUSANA; PAPADEMETRIO, DANIELA; ANAYA LAURA; BLANCO GUILLERMO; ALVAREZ ELIDA.

Mar del Plata, Buenos aires

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica - Reunión Sociedad Argentina de Fisiología 2011 - II Congreso Nacional AACYTAL - IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal del Laboratorio y el Progreso de la Ciencia; 2011

Resumen : BNIP3 es una proteína de la familia Bcl-2 que induce muerte celular por inserción en la membrana mitocondrial en tanto la localización nuclear se asocia a resistencia a drogas citotóxicas. BNIP3 también induce autofagia y en algunas neoplasias se observó su silenciamiento epigenético. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la modulación de BNIP3 y los niveles de autofagia en células leucémicas U937, K562 y Raji por tratamiento con arsenito de sodio (NaAsO2) y MG132. Determinamos el efecto citotóxico 90% (EC90) a 72 hs por citometría de flujo y con los valores obtenidos para cada droga en cada línea se evaluó: 1)autofagia a 24 hs por expresión de LC3 y tinción con monodancyl-cadaverina (MDC) por citometría de flujo y microscopía de fluorescencia; 2) la expresión y localización subcelular de BNIP3 por western blot en fracciones proteicas nucleares y citoplasmáticas; 3) la expresión de ARNm de BNIP3 por RT-PCR. Los resultados mostraron expresión basal de la proteína BNIP3 sólo a nivel nuclear. El tratamiento individual y combinado produjo un aumento de BNIP3 en la fracción citoplásmica con desaparición de la fracción nuclear en K562 y U937 pero no en Raji. En las tres líneas se observó un incremento de la expresión de LC3 con respecto a los basales luego del tratamiento con la dosis EC90 para AsNaO2 (3.29, 1.20, 5.54 índice de incremento para K562, Raji y U937 respectivamente), MG132 (4.87, 2.24, 2.71) y la combinación de ambas (2.27, 3.90, 3.65). El ARNm de BNIP3 se detectó en U937 y K562 y no se modificó con los tratamientos. Contrariamente el nivel ARNm de BNIP3 fue muy bajo en las células Raji en todas las condiciones pero en presencia de 5-azacitidina (hipometilante) 5 mM aumentó su expresión. Concluimos que las drogas inducen muerte asociada con autofagia en las tres líneas celulares y traslocación núcleo-citoplásmica de BNIP3 por tratamiento con AsNaO2 y MG132 en células U937 y K562 pero no en Raji debido en parte a su silenciamiento epigenético.