Modulación de BNIP3 citoplasmático y nuclear durante la inducción de muerte celular por arsenito de sodio (AsNaO2), MG 132 y azacitidina en células leucémicas mieloides

CAVALIERE V., LOMBARDO T., ANAYA L., COSTANTINO S., ALVAREZ E., BLANCO G

Mar del Plata, Buenos aires

Congreso; XX Congreso Argentino de Hematología, IV Congreso de la División Inter-Americana de la International Society of Hematology, VI Congreso del Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo, VI Congreso de Enfermería Hematológica; 2011

BNIP3 es una proteína miembro de la familia Bcl-2 que induce muerte programada en algunos tumores por vía de su inserción en la membrana mitocondrial. Su localización nuclear fue descripta en algunas neoplasias y se asocia a formas agresivas resistentes al tratamiento con drogas citotóxicas. En este trabajo evaluamos la expresión basal y modulación de BNIP3 a nivel de proteína y ARNm en células leucémicas U937, K562 y Raji luego de inducir la muerte celular por tratamiento individual y combinado con arsenito de sodio (NaAsO2) y el inhibidor de proteasoma MG132. El efecto citotóxico se estudió exponiendo las células en cultivo durante 72hs por triplicado en un rango de 7 dosis, con posterior tinción con ioduro de propidio y fluoresceína diacetato  y evaluación por citometría de flujo. Se determinó el efecto citotóxico 90% (EC90) sobre cada línea celular y se expusieron células a esta dosis durante 24h para luego obtener fracciones proteicas nucleares y citoplasmáticas por separado. La expresión y localización subcelular se determinó por western blot con anticuerpo monoclonal contra BNIP3. La expresión de ARNm de BNIP3 se determinó por RT-PCR. Los resultados mostraron que el ARNm de BNIP3 es detectable en U937 y K562 pero la línea Raji mostró niveles más bajos. Los tratamientos con EC90 no modificaron la expresión de ARNm de BNIP3 en ningún caso pero el tratamiento con 5mM azacitidina (hipometilante) durante 24hs aumentó sensiblemente la expresión de ARNm de BNIP3. El BNIP3 basal proteico fue detectado en las tres líneas pero sólo en la fracción nuclear. Con los tratamientos se observó la presencia de BNIP3 en la fracción proteica citoplásmica y la desaparición en la fracción nuclear en células K562 y U937. Las células Raji en cambio no mostraron cambios en la expresión de BNIP3 nuclear con los tratamientos. Concluimos que BNIP3 tendría un rol en la inducción de muerte por tratamiento con AsNaO2 y MG132 en células leucémicas mieloides U937 y K562 pero no en células Raji. La falta de participación de BNIP3 en la inducción de muerte en células Raji se debería la silenciamiento epigenético.