La inmunización oral con pGRA4 genera inmunidad de mucosas y sistémica con capacidad protectiva frente a la infección por T. gondii.

GONZÁLEZ COBIELLO P; SANCHEZ, V; MALCHIODI E; MARTÍN V; FRANK F

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoología

Considerando que la vía de entrada de T. gondii es la mucosa, la prioridad sería generar una eficiente estimulación de la inmunidad local y sistémica. A modo de generar este tipo de respuestas utilizamos Salmonella entérica atenuada (S) como sistema de delivery plasmídico, empleando así la vía habitual de infección. Anteriormente hemos demostrado que la proteína de los gránulos densos GRA4 posee valor immunoprotectivo. En este trabajo inmunizamos grupos de ratones hembras C3H/HeN con cuatro dosis de S.pGRA4 sola (G1), S.pROP2 sola (G2), o ambas (G3), empleando como grupos control ratones inmunizados con PBS y con S.pcDNA3 vacio (C). Pudimos observar que tanto G1 como G2 produjeron niveles significativos de IgAs medidos en lavados intestinales de los animales inmunizados. Todos los grupos mostraron altos títulos sistémicos de IgG específicos, medidos por ELISA indirecto. Quince días posteriores a la última inmunización se analizó la respuesta celular específica por DTH, siendo la misma significativa en todos los grupos. Tras la infección, los títulos de IgG específicos se vieron incrementados hasta 41 veces en el G1, y sólo 2 veces en el G2, mientras que el G3 presentó un incremento de entre 2 y 5 veces. La respuesta obtenida fue capaz de reducir significativamente la carga parasitaria (entre 44 y 48%) en todos los grupos inmunizados, previniendo el aumento sérico de enzimas marcadoras de daño tisular. Como estrategias para intentar mejorar la respuesta evaluamos la coadministración con el gen de GM-CSF o un refuerzo con GRA4 adyuvada por Sales de Aluminio. Para esto, se realizaron inmunizaciones con 4 dosis de S.pGRA4 sola (G1) o acompañada de S.pGM-CSF (G4), o bien 2 dosis de S.pGRA4 + 2 dosis de GRA4+Alum (G5). Los ratones de los grupos G1, G4 y G5 mostraron niveles significativos de IgG específicos, siendo G5 quien presentara mayor título. Observamos además una respuesta celular específica medida por DTH, no mostrando diferencias entre sí. La respuesta obtenida con la coadministración del gen de GM-CSF (G4, 39.4%), no fue capaz de mejorar la protección generada por S.pGRA4 (G1), mientras que el protocolo de prime-boost (G5) mejoró la respuesta obtenida, logrando una reducción de la carga parasitaria de 65.8%. Nuestros resultados indicarían que la inmunización por vía oral empleando Salmonella como sistema de delivery puede ser mejorada mediante el boost con proteína por vía intramuscular, promoviendo de esta manera una inmunidad sistémica y de mucosas, capaz de prevenir el daño tisular, generando protección frente al desafío.