IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un método para la detección de anticuerpos anti proinsulina por citometría de flujo: una plataforma alternativa para inmunoensayos en Diabetes Mellitus autoinmune
Autor/es:
GUERRA, LUCIANO L.; FACCINETTI, NATALIA I.; TRABUCCHI, ALDANA; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.
Lugar:
San Miguel de Tucumán
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
Desarrollo de
un método para la detección de anticuerpos anti proinsulina por
citometría de flujo: una plataforma alternativa para inmunoensayos en
Diabetes Mellitus autoinmune
Guerra, Luciano L.; Faccinetti, Natalia I.; Trabucchi, Aldana; Iacono, Rubén F.; Poskus, Edgardo; Valdez, Silvina N.
Cátedra
de Inmunología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de
Buenos Aires (UBA) e Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral,
Profesor Ricardo A. Margni (IDEHU, CONICET- UBA).
La concentración mínima detectable de autoanticuerpos en diabetes mellitus tipo 1 es del orden de 10-12M,
requiriendo métodos altamente sensibles y específicos. En la búsqueda
de técnicas no radiactivas de alta sensibilidad y con potencial
detección de varios analitos simultáneamente se implementó la
Citometría de Flujo como una alternativa ventajosa sobre el método de
referencia.
El
objetivo del presente trabajo fue la optimización de un método para la
detección de anticuerpos anti-proinsulina basado en Citometría de
Flujo.
Se
utilizaron microesferas de poliestireno de 2,07±0,05 µm de diámetro
sobre las que se adsorbió Proinsulina (PI) humana (28 µg/100 cm2).
Para la puesta a punto se utilizó un suero policlonal de conejo
anti-PI generado en nuestro laboratorio y como controles se incluyeron
un suero preinmune de conejo (SC) y microesferas bloqueadas con BSA.
El inmunoensayo consistió en la incubación del suero anti-PI con 5x105
microesferas. Luego de la incubación se agregó un anticuerpo anti-IgG
de conejo conjugado con fluoresceína. Finalmente las microesferas se
resuspendieron en PBS para ser analizadas por Citometría de flujo (λexcitación = 488 nm).
Los
resultados se expresaron en Intensidad de Fluorescencia Media
corregida por el inespecífico (IFM), arrojando valores de 0,18 para el
SC y 270,98 para el suero anti-PI. Se evaluaron distintas diluciones de
suero específico obteniéndose valores de IFM decrecientes con el
aumento de la dilución, alcanzando un valor de 6,65 para la dilución
1/3125. El análisis preliminar de un suero de paciente diabético con
autoanticuerpos anti-PI arrojó un IFM de 20,38.
El
método desarrollado permitió detectar anticuerpos anti-PI, utilizando
poco volumen de muestra y de manera sensible valiéndose de la detección
de marca fluorescente. El uso de microesferas de poliestireno de
diversos tamaños adsorbidas con distintos autoantígenos factibilizaría
la detección de varios autoanticuerpos involucrados en diabetes
autoinmune.