IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INDUCCIÓN DE MUERTE CELULAR CON MODULACIÓN DE BNIP3 Y AUTOFAGIA POR ASNAO2 Y EL INHIBIDOR DEL PROTEOSOMA MG132 EN CÉLULAS LEUCÉMICAS MIELOIDES Y LINFOIDES
Autor/es:
CAVALIERE VICTORIA; LOMBARDO TOMÁS; COSTANTINO SUSANA; PAPADEMETRIO DANIELA; ANAYA LAURA; BLANCO GUILLERMO; ÁLVAREZ, ÉLIDA M.C
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad argentina de Investigación Clínica; 2011
Institución organizadora:
SAIC-SAFIS-AACYTAL
Resumen:
BNIP3 es una proteína de la familia
Bcl-2 que induce muerte celular por inserción en la membrana mitocondrial en
tanto la localización nuclear se asocia a resistencia a drogas citotóxicas.
BNIP3 también induce autofagia y en algunas neoplasias se observó su
silenciamiento epigenético. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la modulación
de BNIP3 y los niveles de autofagia en células leucémicas U937, K562 y Raji por
tratamiento con arsenito de sodio (NaAsO2) y MG132. Determinamos el efecto
citotóxico 90% (EC90) a 72 hs por citometría de flujo y con los valores
obtenidos para cada droga en cada línea se evaluó: 1)autofagia a 24 hs por
expresión de LC3 y tinción con monodancyl-cadaverina (MDC) por citometría de
flujo y microscopía de fluorescencia; 2) la expresión y localización subcelular
de BNIP3 por western blot en fracciones proteicas nucleares y citoplasmáticas;
3) la expresión de ARNm de BNIP3 por RT-PCR.
Los resultados mostraron expresión
basal de la proteína BNIP3 sólo a nivel nuclear. El tratamiento individual y
combinado produjo un aumento de BNIP3 en la fracción citoplásmica con
desaparición de la fracción nuclear en K562 y U937 pero no en Raji. En las tres
líneas se observó un incremento de la expresión de LC3 con respecto a los
basales luego del tratamiento con la dosis EC90 para AsNaO2 (3.29, 1.20, 5.54
índice de incremento para K562, Raji y U937 respectivamente), MG132 (4.87,
2.24, 2.71) y la combinación de ambas (2.27, 3.90, 3.65). El ARNm de BNIP3 se
detectó en U937 y K562 y no se modificó con los tratamientos. Contrariamente el
nivel ARNm de BNIP3 fue muy bajo en las células Raji en todas las condiciones
pero en presencia de 5-azacitidina (hipometilante) 5 mM aumentó su expresión.
Concluimos que las drogas
inducen muerte asociada con autofagia en las tres líneas celulares y
traslocación núcleo-citoplásmica de BNIP3 por tratamiento con AsNaO2 y MG132 en
células U937 y K562 pero no en Raji debido en parte a su silenciamiento
epigenético.