La activación de calcineurina y su interacción con el factor de transcripcion NFAT es necesaria para la inducción del promotor de COX-2 y la expresión de la enzima en estroma de endometrio.

FLORENCIA ABRAHAM; CECILIA PARRADO; ESTELA REY; TERESA GENTILE; ANDREA CANELLADA

San Miguel de Tucumán

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Sociedad Argentina de Inmunología

Calcineurina (Cn) /NFAT regula la expresión de COX-2 en varias células. Esta ruta se bloquea con inhibidores de Cn (Ciclosporina A, CsA) o inhibidores de la interacción de Cn y NFAT (péptido VIVIT). Demostramos que en células de estroma uterino de rata (ESC) COX-2 se induce de forma Cn-dependiente por estímulos que incrementan [Ca2+i] (PMA+Io, PIo). OBJETIVO: Estudiar si NFAT en ESC participa en la inducción de COX-2. MÉTODOS: Se cultivaron durante 7 días ESC aisladas de útero de ratas. Se estudió la participación de Cn y NFAT en la activación del promotor de Cox2 mediante la estimulación in vitro (PIo con y sin pretratamiento con CsA) de ESC transfectadas con plásmidos reporteros codificantes de luciferasa bajo el control de diferentes deleciones del promotor de Cox2, y la detección posterior de la actividad luciferasa. La participación de NFAT en la inducción por señales de calcio de COX-2 se estudió analizando por FACs la expresión de COX-2 en ESC transfectadas con un plásmido codificante del péptido VIVIT fusionado a GFP (pVIVIT-GFP), o con un plásmido control (pN1-GFP), y posteriormente estimuladas con PIo. RESULTADOS: PIo indujo un incremento promedio de 2,41±0.33 (p<0,05) en la actividad luciferasa por sobre los controles de células no estimuladas, en ESC transfectadas con las construcciones plasmídicas que contenían los sitios de unión a NFAT en el promotor de Cox2. La inducción fue inhibida en presencia de CsA (0.98±0,02; p<0,01). La estimulación por PIo de la expresión de COX-2 en ESC (GFP+) fue inhibida en 65±8 % (p<0,05), en las células que habían sido transfectadas con GFP-VIVIT, comparadas con células que fueron transfectadas con el plásmido control. CONCLUSIONES: Los sitios de unión a NFAT en el promotor de Cox2 son necesarios para la activación Cn-dependiente del mismo en ESC. El bloqueo de la interacción de Cn y NFAT, necesaria para la activación de este factor de transcripción, impide la estimulación por PIo de la expresión de COX-2 en ESC