MECANISMOS DE REGULACIÓN DEL GEN TLR4 A NIVEL DE SU RNA MENSAJERO; ESTUDIO FUNCIONAL DEL POLIMORFISMO TLR4 +3725 G/C RECIENTEMENTE ASOCIADO A DISMINUCIÓN DEL ÍNDICE DE MASA CORPORAL EN LA POBLACIÓN DE BUENOS AIRES

LUCIA S BARCOS; TOSCANI, ANDRES MARTÍN; FEDERICO COLUCCIO LESKOW; G. D,FRECHTEL; POSKUS, EDGARDO; PENAS STEINHARDT, ALBERTO

Buenos Aires

Congreso; 14º Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2012

Hospital de Clínicas - Universidad de Buenos Aires

Objetivos: En las últimas décadas, la prevalencia de Obesidad y Diabetes Mellitus tipo 2 (DMT2) se ha incrementado en todo el mundo. Cambios en la repuesta inmune innata están involucrados en la patogénesis de estos trastornos metabólicos, destacándose el rol de la microbiota intestinal. El Toll like receptor 4 (TLR4), participa en la repuesta inmune innata uniendo LPS. En ratones que presentan una mutación inactivante de TLR4 se previene la obesidad inducida por dieta. Recientemente hemos establecido una asociación entre el polimorfismo +3725 G/C en el 3´UTR del gen TLR4 y disminución en el índice de masa corporal. Nos proponemos estudiar los mecanismos de regulación del gen tlr4 a nivel de su mRNA en función de la presencia del polimorfismo +3725 G/C. Materiales y Métodos: Se estudió bioinformaticamente la estructura de la región 3´UTR del gen TLR4, posteriormente se clonaron las regiones 3´UTR de las dos variantes polimórficas previamente encontradas en la población de Buenos Aires. En un vector reportero se expresó bajo el control de un promotor constitutivo el cDNA del gen de la Luciferasa fusionada a la región 3´UTR de TLR4, permitiendo estudiar la estabilidad de los mRNAs. Para evaluar la expresión diferencial de ambas variantes del polimorfismo +3725 G/C, dichos vectores reporteros se transfectaron en una linea celular humana (HeLa). Resultados: El estudio bioinformático permitió determina en la secuencia del 3´UTR del gen TLR4 la presencia de sitios potencialmente regulatorios de la estabilidad del mRNA de dicho gen, entre los que podemos destacar cinco sitios AREs y dos sitios de unión para los miRNAs hsa-miR-140-5p y hsa-miR-145. Los estudios realizados en cultivos celulares determinaron el carácter funcional de polimorfismo +3725 G/C. En particular se determinó que 24 horas después de la transfección la actividad del gen reportero era un 30% menor para la construcción portadora de la variante +3725 C con respecto al constructo wt (p=0,0001). Conclusiones: La disminución en la estabilidad del mRNA en los portadores de la variante +3725 G/C podría resultar en la regulación negativa de las vías inflamatorias relacionada con la inducción de trastornos metabólicos. Dichos resultados son congruentes con estudios previos que demuestran una asociación entre el polimorfismo +3725 G/C (rs11536889) del gen TLR4 y la disminución en el índice de masa corporal.