IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Capacidad migratoria de macrófagos alveolares provenientes del lavado broncoalveolar de pacientes con enfermedades pulmonares intersticiales difusas.
Autor/es:
ERNST G, JANCIC C, AUTERI S, CARO F, GALÍNDEZ F, HAJOS S, GEFFNER J Y GRYNBLAT P.
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XXVIII Congreso Argentino y IX Sudamericano de Broncoscopía; 2012
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Broncoscopía
Resumen:
Introducción: La celularidad del lavado
broncoalveolar (BAL) es una herramienta que contribuiría al seguimiento de
algunas Enfermedades Pulmonares Intersticiales Difusas (EPID)1. El
ácido hialurónico (AH), ha sido descripto recientemente como modulador de
la respuesta inmune2. Sus funciones varían de acuerdo a su tamaño:
AH de alto peso molecular (AH-APM) regula la homeostasis, mientras que AH de
bajo PM (AH-BPM) estimula la síntesis de citoquinas y promueve el reclutamiento
celular3. Anteriormente hemos reportado un aumento significativo en
los niveles de AH en el BAL de pacientes con EPID. El objetivo de este trabajo
fue evaluar si el AH es capaz de inducir la quimiotaxis de macrófagos
alveolares y analizar la participación de los receptores CD44 y RHAMM en
este proceso.
Materiales y Métodos: Se utilizaron macrófagos
alveolares obtenidos a partir de muestras de BAL de pacientes con EPID (n=25) y
de controles post-operatorios de estenosis de tráquea (n=13). Estos se
seleccionaron por adherencia, demostrando su pureza (>85%) por citometría de
flujo y microscopía confocal utilizando anticuerpos anti-HLA-DR, CD64 y CD14.
Realizamos ensayos de quimiotaxis
utilizando transwell, sobre los cuales se sembraron 3x105 macrófagos
alveolares. Evaluamos la capacidad migratoria de los macrófagos en
respuesta a AH-APM y AH-BPM. El recuento de células migratorias se realizó por
microscopia de fluorescencia y citometría de flujo. Para evaluar el rol
de CD44 y RAAHM en la migración se realizaron pre-tratamientos de los
macrófagos alveolares con anticuerpos bloqueantes anti-CD44, y anti-RHAMM.
Resultados: El AH-BPM indujo la quimiotaxis de
los macrófagos en forma dosis dependiente, observándose una respuesta
significativa en el rango de concentraciones encontrado en el BAL de pacientes
con EPID (2.000-2.500 ng/ml). Por el contrario, el AH-APM no indujo respuesta
alguna. A la migración de los macrófagos frente al medio de cultivo solo, se le
asignó arbitrariamente el valor de 100 y la respuesta quimiotáctica frente a
AH-BPM fue calculada mediante la siguiente fórmula:
(N° de macrófagos migrantes frente a AH-BPM/ N° de
macrófagos migrantes frente a RPMI) X100. Empleando una concentración de AH-BPM
de 2.000 ng/ml se observó una migración = 208,5±36,0; p < 0,05. El
pre-tratamiento con anti-CD44 inhibió la migración hacia AH-BPM, obteniéndose
un valor de 135,4±8,1; p< 0,05. Por el contrario, el bloqueo con un
anticuerpo anti-RHAMM no ejerció efecto inhibitorio alguno. Encontramos además
que los pacientes con NSIP, Sarcoidosis y Neumonitis por Hipersensibilidad
presentaron una mayor concentración de células en el BAL (0,37x106
cél/ml; 0,26x106 cél/ml; 0,40x106
cél/ml respectivamente) vs el grupo control: 0,11x106
cél/ml; p< 0,05.
Conclusiones: AH-BPM, en concentraciones
compatibles con aquellas encontradas en el BAL de pacientes con EPID induce la
quimiotaxis de macrófagos alveolares, mecanismo que podría explicar, al menos
parcialmente, la incrementada celularidad hallada en el BAL proveniente de
estos pacientes.