IDEHU   05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un método para la detección de anticuerpos anti proinsulina por citometría de flujo: una plataforma alternativa para inmunoensayos en Diabetes Mellitus autoinmune
Autor/es:
GUERRA, LUCIANO L.; FACCINETTI, NATALIA I.; TRABUCCHI, ALDANA; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.
Lugar:
San Miguel de Tucumán, Tucumán
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
La concentración mínima detectable de autoanticuerpos en diabetes mellitus tipo 1 es del orden de 10-12M, requiriendo métodos altamente sensibles y específicos. En la búsqueda de técnicas no radiactivas de alta sensibilidad y con potencial detección de varios analitos simultáneamente se implementó la Citometría de Flujo como una alternativa ventajosa sobre el método de referencia. El objetivo del presente trabajo fue la optimización de un método para la detección de anticuerpos anti-proinsulina basado en Citometría de Flujo. Se utilizaron microesferas de poliestireno de 2,07±0,05 µm de diámetro sobre las que se adsorbió Proinsulina (PI) humana (28 µg/100 cm2). Para la puesta a punto se utilizó un suero policlonal de conejo anti-PI generado en nuestro laboratorio y como controles se incluyeron un suero preinmune de conejo (SC) y microesferas bloqueadas con BSA. El inmunoensayo consistió en la incubación del suero anti-PI con 5x105 microesferas. Luego de la incubación se agregó un anticuerpo anti-IgG de conejo conjugado con fluoresceína. Finalmente las microesferas se resuspendieron en PBS para ser analizadas por Citometría de flujo (λexcitación = 488 nm). Los resultados se expresaron en Intensidad de Fluorescencia Media corregida por el inespecífico (IFM), arrojando valores de 0,18 para el SC y 270,98 para el suero anti-PI. Se evaluaron distintas diluciones de suero específico obteniéndose valores de IFM decrecientes con el aumento de la dilución, alcanzando un valor de 6,65 para la dilución 1/3125. El análisis preliminar de un suero de paciente diabético con autoanticuerpos anti-PI arrojó un IFM de 20,38. El método desarrollado permitió detectar anticuerpos anti-PI, utilizando poco volumen de muestra y de manera sensible valiéndose de la detección de marca fluorescente. El uso de microesferas de poliestireno de diversos tamaños adsorbidas con distintos autoantígenos factibilizaría la detección de varios autoanticuerpos involucrados en diabetes autoinmune.