Trichinella spiralis: Relaci¨®n de la infecci¨®n con el sistema inmune de mucosas

GENTILINI MV, VENTURIELLO SM

Congreso; XX Congreso Latinoamericano de Prasitolog¨ªa; 2011

Mecanismos inmunol¨®gicos de protecci¨®n del hospedador contra el nematodo T. spiralis est¨¢n dirigidos contra los vermes adultos (VA) y contra las larvas reci¨¦n nacidas o migrantes (LRN). El ataque inmunol¨®gico contra el VA se manifiesta por un rechazo acelerado del intestino (1) mediado por linfocitos T y mastocitos (2). Este fen¨®meno coincide con la m¨¢xima respuesta inflamatoria intestinal caracterizada por citoquinas proinflamatorias, aumento en el recambio de enterocitos, c¨¦lulas caliciformes, eosin¨®filos y c¨¦lulas de Paneth (3). Las LRN son destru¨ªdas en presencia de c¨¦lulas activadas por Acs espec¨ªficos mediante el mecanismo de citotoxicidad celular dependiente de Acs (CCDA) (4). Considerando que: 1-el primer est¨ªmulo antig¨¦nico en trichinellosis es en la mucosa intestinal; 2-el sistema inmune de mucosas es un sistema integrado en el cual la inmunizaci¨®n en un sitio confiere inmunidad en otro (5); 3-las LRN durante su migraci¨®n atraviesan pulm¨®n (6) y que dicho ¨®rgano es sugerido por algunos autores como sitio de retenci¨®n y destrucci¨®n parasitaria (7); 4-las LRN son destru¨ªdas mediante CCDA sin conocerse el sitio del organismo donde ocurre este fen¨®meno, nuestro objetivo fue determinar en ratas Wistar infectadas si el pulm¨®n puede actuar como ¨®rgano de retenci¨®n y destrucci¨®n parasitaria. Para esto se caracteriz¨® la respuesta inmunol¨®gica a nivel pulmonar durante la fase intestinal (0-13 dpi) de la infecci¨®n con T. spiralis. Estudios histol¨®gicos e inmunohistoqu¨ªmicos Nuestros resultados demostraron el r¨¢pido desarrollo de una respuesta inflamatoria pulmonar simult¨¢nea al proceso inflamatorio intestinal, caracterizada por infiltrados mastocitario y eosinof¨ªlico (1 dpi), hiperplasia del BALT (2 dpi) y de las c¨¦lulas caliciformes con producci¨®n de moco a partir (3 dpi). El fenotipo celular presentado es de tipo Th2 con incremento en las poblaciones celulares IgE+, LT CD4+ (IgE+:197¡À19 vs. 88¡À11; LT CD4+: 307¡À32 vs. 195¡À11 N¡ã de c¨¦lulas/15 campos, animales infectados vs. control). Cin¨¦tica de aparici¨®n de citoquinas, quemoquinas en extractos pulmonares mediante ELISA e inmunoelectrotransferencia TNFa altos niveles fueron observados al 1-2 dpi (485¡À58- 370¡À54 vs. 140¡À43 pg/ml); INF¦Ã 1-6 dpi (162¡À12- 233¡À35 vs. 80¡À7 pg/ml); IL-10 al 3- 6 dpi (142¡À12- 124¡À10 vs. 68¡À4 pg/ml); TGF-¦Â al 6-13 dpi (10457¡À1512, 13276¡À1517 vs. 7662¡À1001 pg/ml); IL-4 se encontr¨® elevada desde el 1 dpi, siendo significativamente elevada al 6 y 13 dpi (111¡À25, 239¡À86 vs. 11¡À7 pg/ml); IL-13 1-6 dpi (16¡À2- 9¡À3 RP= relaci¨®n de densidades ¨®pticas teniendo en cuenta la presencia de ¦Â actina); IL-5 e IL-12 permanecieron ligeramente elevadas durante el per¨ªodo estudiado. CCL11, quemoquina involucrada en la migraci¨®n de eosin¨®filos (8), se encontr¨® elevada desde el 1-13 dpi (1809¡À148- 1727¡À285 vs. 286¡À25 pg/m). CCL28, quemoquina involucrada en el tr¨¢fico de c¨¦lulas inmunes (9), se hall¨® elevada al 1-2 dpi (13¡À0- 15¡À4 RP). Cin¨¦tica de aparici¨®n de Igs totales y Acs anti-productos de excreci¨®n-secreci¨®n (anti-PES-LM) en extractos pulmonares mediante ELISA IgA, IgE total se hallaron desde el 1 dpi y durante el periodo estudiado, IgG1 e IgG2a total desde el 3 dpi, presentando niveles significativamente elevados al 13 dpi (IgA total: 1628¡À165 vs. 562¡À85 ¦Ìg/ml; IgE total: 5810¡À1604 vs. 6.8¡À3.44 ng/ml; IgG1: 17.48¡À0.33 vs. 1.90¡À0.04 ng/ml; IgG2a: 18.23¡À0.64 vs. 2.40¡À0.13 ng/ml). IgA e IgE anti-PES-LM fueron detectadas durante el per¨ªodo estudiado. IgG1 desde el 3 dpi e IgG2a del 1 al 3 dpi. IgE e IgG1 espec¨ªficas presentaron una significativa disminuci¨®n al 6 dpi. Secreci¨®n de Igs totales y anti-PES-LM mediante ELISPOT C¨¦lulas secretoras de todos los isotipos fueron detectadas durante el per¨ªodo estudiado presentando s¨®lo un aumento las c¨¦lulas secretoras de IgE e IgG1 al 13 dpi. C¨¦lulas secretoras de IgA, IgE e IgG2a espec¨ªficas fueron detectadas desde el 2 dpi y de IgG1 al 13 dpi. Presencia y niveles de Acs anti- superficie de LRN en sueros mediante IFI En sueros al 6 dpi se detectaron IgE e IgG2a anti-LRN con t¨ªtulo de 4 en el 63% y 13% de los sueros analizados; al 13 dpi en todos los isotipos estudiados: IgE en el 100% de los sueros con t¨ªtulo de 128; IgG1, IgG2a en el 86% de los sueros e IgA en el 71% con t¨ªtulos de 64. Estudio del pulm¨®n como ¨®rgano de retenci¨®n y destrucci¨®n parasitaria Para determinar si el pulm¨®n act¨²a como un ¨®rgano de retenci¨®n parasitaria, se evalu¨® la presencia del par¨¢sito en cortes de tejido pulmonar y en suspensiones pulmonares a los 6 y 13 dpi mediante microscop¨ªa ¨®ptica. LRN se hallaron en par¨¦nquima y en alv¨¦olos y se recuperaron de pulmones a ambos dpi. En el estudio del pulm¨®n como ¨®rgano de destrucci¨®n parasitaria, se evalu¨® la capacidad citot¨®xica de c¨¦lulas de BAL y de par¨¦nquima frente a LRN. Ensayos de citotoxicidad celular fueron realizados en presencia y ausencia de suero citot¨®xico de referencia midi¨¦ndose el porcentaje de mortalidad de la LRN. Los resultados se muestran en la tabla I.