IDEHU 05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio estructural de la proteína IA 2
Autor/es:
PRIMO ME, SOSA LNF, NOGUERA ME, RISSO VA, POSKUS E, ERMÁCORA MR
Lugar:
C. A. Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
La proteína asociada a insulinoma IA‑2 es un miembro de la familia de proteínas tirosinas fosfatasas tipo receptor que se encuentra localizada específicamente en las membranas de los gránulos de secreción (GS) de células de origen neuroendocrino. La secuencia de IA‑2 incluye en su dominio extracelular (IA‑2ec, residuos 1‑576) un péptido señal (PS, residuos 1‑34), dos sitios de N‑glicosilación y tres sitios posibles y uno demostrado de escisión para pro‑hormonas convertasas. El dominio de transmenbrana (TM, residuos 577‑600) separa a IA‑2ec del dominio intracitoplasmático (IA‑2ic, residuos 601‑979). Durante la maduración de los GS, IA‑2 sufre una serie de modificaciones post‑traduccionales que incluye un clivaje de IA‑2ec entre los residuos 448 y 449 dando origen a la proteína madura (IA‑2449‑979). Previamente, hemos demostrado que el dominio extracelular maduro de IA‑2 (IA‑2em, residuos 449-576) in vitro se degrada por especies reactivas del oxígeno en sus extremos carboxilo y amino terminal perdiendo ~ 20 residuos de cada extremo para dar un dominio cristalizable que comprende los residuos 469‑5571. La pérdida de los 20 residuos que conectan a IA‑2em con la región de TM, predichos como una hélice α, limita la interpretación de la disposición de IA‑2em con respecto a la superficie celular y a su posible función.
El objetivo del presente trabajo fue clonar, expresar, purificar y caracterizar a la proteína que contiene los residuos 469-576. Por dicroísmo circular se demostró que IA‑2469-576 posee similar estructura secundaria, terciaria y estabilidad termodinámica que IA‑2em, pero a diferencia de ésta, no se procesa en su extremo C‑ terminal, obteniéndose cristales a pH 4.5, 7.5 y 8.5 que se están analizando. La resolución de su estructura nos permitirá realizar un modelo de IA‑2em insertado en la membrana plasmática.
