Determinación del patrón de uniones disulfuros en IA-2, proteína relacionada con la secreción de insulina.

SOSA, L.N.F,.; NOGUERA M.E.,; RISSO, V.A, ; POSKUS, E,; ERMÁCORA M.R; PRIMO M.E

CABA

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica.; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

IA-2 es una proteína transmembrana de gránulos de secreción de células neuroendocrinas, posee un dominio intracelular tipo PTP, un dominio transmembrana y un dominio extracelular. Solimena y col. identificaron a IA-2 como una proteína que activa una vía complementaria de proliferación de las células beta pancreática, donde se acopla la exocitosis del gránulo de secreción con su biogénesis1. Poco se conoce respecto a la estructura de esta proteína, recientemente nuestro grupo de trabajo ha resuelto la estructura a nivel atómico del dominio extracelular de la misma2. Su dominio amino terminal, presenta un motivo rico en cisteínas, altamente conservado en diferentes especies: C1-6X-C2-5X-C3-8X-C4. El objetivo del presente trabajo fue realizar la determinación del patrón de uniones disulfuro de este dominio. Para esto se realizó la clonación, expresión y purificación de la región N-terminal rica en cisteínas. La proteína se expresó y purificó a partir de cuerpos de inclusión. Luego de su solubilización se realizó la modificación de las cisteínas con un agente alquilante y la proteólisis controlada con la enzima EndoGluC. Los fragmentos obtenidos fueron separados por HPLC fase reversa y se realizó la determinación de masa de los mismos por MALDI-TOF. Los resultados mostraron un claro patrón de unión entre las cisteínas C1 y C2.