CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

La proteína asociada a insulinoma IA2 es un miembro de la familia de proteínas tirosinas fosfatasas tipo receptor que se encuentra localizada específicamente en las membranas de los gránulos de secreción (GS) de células de origen neuroendocrino. La secuencia de IA2 incluye en su dominio extracelular (IA2ec, residuos 1576) un péptido señal (PS, residuos 134), dos sitios de Nglicosilación y tres sitios posibles y uno demostrado de escisión para prohormonas convertasas. El dominio de transmenbrana (TM, residuos 577600) separa a IA2ec del dominio intracitoplasmático (IA2ic, residuos 601979). Durante la maduración de los GS, IA2 sufre una serie de modificaciones posttraduccionales que incluye un clivaje de IA2ec entre los residuos 448 y 449 dando origen a la proteína madura (IA2449979). Previamente, hemos demostrado que el dominio extracelular maduro de IA2 (IA2em, residuos 449-576) in vitro se degrada por especies reactivas del oxígeno en sus extremos carboxilo y amino terminal perdiendo ~ 20 residuos de cada extremo para dar un dominio cristalizable que comprende los residuos 4695571. La pérdida de los 20 residuos que conectan a IA2em con la región de TM, predichos como una hélice ?, limita la interpretación de la disposición de IA2em con respecto a la superficie celular y a su posible función. El objetivo del presente trabajo fue clonar, expresar, purificar y caracterizar a la proteína que contiene los residuos 469-576. Por dicroísmo circular se demostró que IA2469-576 posee similar estructura secundaria, terciaria y estabilidad termodinámica que IA2em, pero a diferencia de ésta, no se procesa en su extremo C terminal, obteniéndose cristales a pH 4.5, 7.5 y 8.5 que se están analizando. La resolución de su estructura nos permitirá realizar un modelo de IA2em insertado en la membrana plasmática.