IDEHU 05542
INSTITUTO DE ESTUDIOS DE LA INMUNIDAD HUMORAL PROF. RICARDO A. MARGNI
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Vesículas de membrana externa de Brucella abortus modulan la respuesta inmune.
Autor/es:
POLLAK, C; DELPINO, MV; BALDI, PC
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; LIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Inmunología
Resumen:
Diversas
bacterias gram negativas liberan
vesículas de membrana externa (VME), que pueden contener factores de
virulencia y modular la respuesta inmunológica del hospedador a favor del
patógeno. Es sabido que Brucella libera algún factor que inhibe la expresión
de TNF-α en células THP-1 (monocitos humanos) activadas por LPS de E. coli.
Nuestro objetivo fue caracterizar la interacción entre VME de Brucella y
células humanas, y su posible papel modulador de la respuesta inmune. Las VME
fueron obtenidas por concentración del medio de crecimiento de Brucella
abortus S2308 y sus proteínas fueron cuantificadas por el método de Bradford.
Las VME se visualizaron por microscopía electrónica y se analizaron por
Western blot con anticuerpos contra LPS de Brucella. La internalización de
VME marcadas con FITC en células fagocíticas (THP-1) y no fagocíticas (HeLa)
se evaluó por microscopía confocal y citometría de flujo. Células THP-1
preincubadas (o no) con VME se incubaron por 24 hs. con LPS de E. coli,
Pam3cys o Flagelina (agonistas de TLR-4, TLR-2 y TLR-5, respectivamente) y se
midieron citoquinas en los sobrenadantes de cultivo mediante ELISAs
comerciales. Se analizó por citometría de flujo la expresión de moléculas de
adhesión en células THP-1 incubadas con VME. El
diámetro de las VME estimado por microscopía electrónica varió entre 30 nm y
178 nm, en concordancia con la bibliografía. Por Western blot se detectó LPS
de Brucella. Se detectó internalización de las VME tanto en células THP-1
como HeLa. La preincubación con 10 µg/ml de VME de Brucella inhibió en un
91%, 95% y 74 % la secreción de TNF- por células THP-1 en respuesta a
LPS, Pam3cys y Flagelina respectivamente, y en un 66%, 87% y 57 % la
respuesta de IL-1β. La expresión de ICAM-1
en las THP-1 aumentó de forma
dosis dependiente luego de la incubación con VME.
Estos resultados indican que las VME de Brucella son
internalizadas por monocitos humanos y modulan negativamente la secreción de
citoquinas proinflamatorias.
