Regulación de la osteoclastogénesis in vitro por extractos placentarios murinos.

CUSTIDIANO ANDREA; SACERDOTI FLAVIAA; URTENECHE M; GENTILE T; CANELLADA A

Buenos Aires

Congreso; 3rd Latinamerican congress on autoimmunity.; 2010

Reumatoidea los macrófagos se diferencian a células degradadoras de hueso (osteoclastos) y factores placentarios inhiben sus síntomas clínicos. En el presente trabajo se analizó el efecto de extractos placentarios de ratón (EPs) sobre la diferenciación osteoclástica de macrófagos murinos RAW 267.4. Métodos: En los extractos obtenidos a los 7 y 18 días de gestación (EP7 y EP18), se determinó por ELISA la concentración (pg/mg) de  IL-4, IL-10, IL-6, IL-12 y TNF-alfa. TGF-beta se determinó por western blot. Los macrófagos se incubaron durante 5 días con las citoquinas RANKL y M-CSF (RM), en presencia y ausencia de los EPs. En las células se evaluó: 1- la actividad fosfatasa TRAP, mediante detección citoquímica de células multinucleadas TRAP (+); 2- Catepsina K (ARNm), por RT-PCR, y 3- actividad de metaloproteasas por enzimograma de los sobrenadantes de cultivo. Resultados: EP7 presentó concentraciones mayores de TNF-alfa (p<0,01), IL-6 e IL-12 (p<0,05), y menores de IL-10 y TGF-beta (p<0,05), que EP18. No hubo diferencia en los niveles de IL-4. Ambos extractos inhibieron significativamente la estimulación por RM del número de células TRAP+, la expresión de cathepsina K, y la actividad gelatinasa de 92 kDa (% Inhibición EP7 =73,5±9,9; 32,3±16,1; 38,6±3,9 respectivamente; EP18= 90,5±8,3; 41,1±4,1; 47,7±13,2 respectivamente). En ausencia de RM, se observó que EP18 inhibió un 46,6±9,1% la expresión de cathepsina K y un 34,9±9,9% la actividad gelatinasa; el efecto de EP7 no fue significativo. Conclusiones: Los EPs inhibieron la diferenciación osteoclástica inducida por RM. En ausencia de RM, el diferente efecto ejercido por EP7 y EP18 podría deberse a las diferencias en su perfil de citoquinas.Se realizarán ensayos de inhibición de citoquinas para evaluar su rol en los efectos observados