“Establecimiento de una biblioteca de VHH de camélidos anti-ovoalbúmina a través de la técnica Phage Display”

JUNCO, M.; SACCODOSSI, NATALIA; DE SIMONE, EMILIO; LEONI, JULIANA ; ALVAREZ, ALEJANDRA

Guadalajara

Encuentro; VIIo Encuentro Latinamericano y del Caribe sobre Biotencnología agropecuaria.; 2010

Sociedad Latinamericana de Biotencnología agropecuaria

Establecimiento de una biblioteca de VHH de camélidos anti-ovoalbúmina a través de la técnica Phage Display. Junco M, Saccodossi N, De Simone E, Leoni G, Alvarez MA.  Sorpresivamente, los camélidos poseen en suero IgG homodiméricas de cadenas pesadas (HCAbs) junto con IgG heterotetraméricas convencionales. Actualmente se conocen 3 isotipos de IgG. IgG1 presenta la estructura convencional, IgG2 e IgG3 son HCAbs. Los HCAbs carecen de cadena liviana y del dominio CH1. En los dominios variables, los HCAbs presentan sustituciones hidrofílicas por hidrofóbicas en posiciones conservadas (VHH). Los VHH poseen alta estabilidad térmica y química y son capaces de interaccionar con epitopes crípticos y modular sitios activos enzimáticos. Son fácilmente expresados en forma recombinante por su bajo PM (15kDa) y son los fragmentos más pequeños con capacidad de reconocer al antígeno en forma específica. El objetivo de este trabajo es obtener, por medio de la técnica de Display en Fagos, la secuencia de VHH con especificidad para Ovoalbúmina (OVA) y luego, expresar la proteína recombinante en tabaco. Para ello, se realizaron RT-PCR a partir de ARN de linfocitos B de sangre periférica de llama previamente inmunizada con OVA. Los productos de las PCR se clonaron dentro del vector pHEN2 killer. Este vector fue generado en nuestro grupo de trabajo, insertando el gen letal ccdB al fagémido pHEN2. El inserto reemplaza a ccdB y la bacteria puede crecer, si ccdB no es reemplazado, se expresa la proteína CCDB, letal para la mayoría de las cepas de bacterias. Secuenciando los clones obtenidos, se confirmó la estructura del vector y los VHH amplificados. Con esta estrategia se simplificará el screening de las colonias y la obtención de VHH específicos para OVA.