IQUIMEFA   05518
INSTITUTO QUIMICA Y METABOLISMO DEL FARMACO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INFLUENCIA DEL ESTRÉS NITROSATIVO EN LA MUERTE CELULAR DE LINFOMA DE CÉLULAS T INDUCIDA POR QUERCETINA-3-METILÉTER.
Autor/es:
MARTINO RENZO; BARREIRO ARCOS LAURA; CREMASCHI GRACIELA; SÜLSEN VALERIA; ALONSO ROSARIO; ANESINI CLAUDIA
Lugar:
Cordoba
Reunión:
Congreso; XLVII REUNIÓN ANUAL DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL; 2015
Resumen:
Se conoce como linfoma a un grupode enfermedades neoplásicas que afecta a la serie linfoide. El linfoma T es elmás agresivo y el que reporta más resistencia a las terapias convencionales. Eneste sentido, los productos naturales aportan una gran cantidad de opcionesterapéuticas efectivas. Por otra parte, se ha reconocido al óxido nítrico (ON)como una molécula capaz de controlar el balance proliferación/muerte celular,por lo que constituye una diana molecular para el tratamiento de tumores. Previamenteidentificamos y aislamos al flavonoide quercetina-3-metiléter (Q3ME) a partiruna fracción bioactiva de Larrea divaricata. El objetivo del presente trabajofue estudiar el efecto de Q3ME sobre una línea de linfoma T murino y establecersu mecanismo de acción, haciendo especial foco en el rol del ON. Para ello, seutilizó una línea celular de linfoma T murino llamada EL-4. En primer lugar,observamos una disminución de la tasa de proliferación, con una CE50de 46,7µg/ml, medido por la técnica de incorporación de timidina tritiada.Además Q3ME fue capaz de inducir apoptosis en forma dosis- dependiente,observando los rasgos clásicos del mismo: exposición de restos defosfatidilserina al exterior de la membrana celular, seguido de condensación dela cromatina, alteraciones nucleares y finalmente ruptura del ADN en fragmentosinternucleosomales. Estos fenómenos lo comprobamos por tres técnicas: tincióncon anexina V/ ioduro de propidio por citometría de flujo; microscopía conbromuro de etidio/ naranja de acridina; y por fragmentación del ADN en gel deagarosa. Se realizó además un ensayo de inmunoblotting de activación decaspasas y clivaje de poli-(ADP-ribosa)-polimerasa (PARP). Se observó unaactivación secuencial de caspasa 9 y 3 y posteriormente de PARP. Asimismo Q3ME afectóel potencial de membrana mitocondrial, evidenciando una activación de laapoptosis por la vía intrínseca. Más aún, produjo arresto celular en faseG0/G1, induciendo un efecto citostático. Por otro lado, Q3ME no solo incrementóla producción de ON, sino también la expresión enzima que lo sintetiza, ONsintasa inducible (iNOS). Para relacionar el incremento en ON con el fenómenode apoptosis, se pre-incubó con elinhibidor de NOS, L-NAME y se midió proliferación y apoptosis. Los resultadosmostraron que L-NAME revirtió los efectos de Q3ME sobre la proliferación yapoptosis, poniendo en evidencia en el rol fundamental del ON en sus efectos. Finalmente,se evaluó el efecto de Q3ME sobre la viabilidad de linfocitos y macrófagosnormales por la técnica del MTT. No se observó ningún cambio en la viabilidadde estas células, siendo el efecto específico sobre las células tumorales.Todos estos datos sugieren que Q3ME incrementa la producción de ON, llevando alas células tumorales al arresto celular y a la activación de la vía intrínsecade apoptosis. La relevancia de este estudio indica que ON podría considerarsecomo una diana potencial para el tratamiento de linfomas.