Lipasas en la preparación de succinatos de 20-beta-pregnanos: Síntesis quimioenzimática de 5-alfa-pregnano-3-ona-20-beta-hemisuccinato

MONSALVE, LEANDRO N.; MACHADO RADA, MAYRA Y.; GHINI, ALBERTO A.; BALDESSARI, ALICIA

Mar del Plata, Argentina

Simposio; XVI Simposio Nacional de Química Orgánica y I Simposio Iberoamericano de Química Orgánica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

LIPASAS EN LA PREPARACIÓN DE SUCCINATOS DE 20ß-PREGNANOS: SINTESIS QUIMIOENZIMATICA DE 5-a-PREGNANO-3-ONA-20-b-HEMISUCCINATO Monsalve, L. N., Machado Rada, M. Y., Ghini, A. y  Baldessari, A. Departamento de Química Organica y UMYMFOR, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Pabellón 2, Cuidad Universitaria, Buenos Aires, Argentina, monsalve@qo.fcen.uba.ar Los conjugados esteroide-proteína presentan múltiples aplicaciones. Es interesante mencionar su uso en la preparación de antisueros utilizados en la generación de anticuerpos. Actualmente existe un deficit de anticuerpos comerciales contra algunos esteroides. Para poder desarrollar un antisuero contra estos esteroides se requieren derivados hemisuccinilados de hidroxilos esteroidales como punto de enlace para su conjugación con alguna proteína, como por ejemplo la seroalbúmina bovina, en el proceso de obtención  del antisuero deseado. Hay ejemplos de síntesis de hemisuccinatos en diversas posiciones del anillo esteroidal como 3b, 6b, 11b y 21, siendo comerciales algunos de ellos; sin embargo, no están descriptos los 20-hemisuccinatos. Debido al impedimento estérico en esta posición no se obtienen resultados satisfactorios en el intento de prepararlos utilizando la metodología descripta para la esterificación de las otras posiciones.  Teniendo en cuenta la actividad desplegada por lipasas en reacciones de acilación y desacilación de compuestos esteroidales, decidimos obtener los hemisuccinatos mediante una metodología enzimática. Aquí presentamos los resultados obtenidos en la preparación de una serie de 20b-succinatos de pregnanos y pregnenos.            La reacción de succinilación se estudió realizando un screening de enzimas, agentes succinilantes, solventes, etc. Con el objeto de conocer las condiciones óptimas de la reacción, se estudiaron diversos parámetros como: relación enzima-sustrato, relación acilante-sustrato, temperatura, etc. Los resultados más satisfactorios  se obtuvieron con lipasa de Candida antarctica en isooctano, y succinato de etilo como agente acilante.           Los esteroides utilizados como sustratos en las reacciones enzimáticas fueron sintetizados a partir de acetato de pregnenolona, purificados y caracterizados completamente mediante las técnicas habituales. Con el objeto de efectuar la preparación de un conjugado esteroide-proteína específico se aplicó la estrategia descripta sobre el 20b-hidroxi -5-a-pregnan-3-ona. La síntesis quimioenzimática aplicada sobre ese sustrato, y posterior hidrólisis regioselectiva del éster etílico, permitió obtener el 5-a-pregnan-3-ona-20b-hemisuccinato (R1=O; R3=R4=R5=H; R2=b-OCO(CH2)2COOH) con excelente rendimiento