RSUME es inducido en hipoxia y modula la actividad transcripcional de HIF-1.

GEREZ, J.; FUERTES, M.; DRUKER, J.; HAEDO, M.; PAEZ-PEREDA, M.; HOLSBOER, F.; SILBERSTEIN, S.; ARZT, E.

Mar del Plata, 17-20 de Noviembre de 2010.

Congreso; LV Reunión de la Sociedad Argentina de Investigacion Clínica.; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clínica.

@font-face { font-family: "Times New Roman"; }@font-face { font-family: "Arial"; }p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman"; }h1 { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; page-break-after: avoid; font-size: 14pt; font-family: "Times New Roman"; }table.MsoNormalTable { font-size: 10pt; font-family: "Times New Roman"; }div.Section1 { page: Section1; }  HIF-1, el factor de transcripción principal en la respuesta adaptativa a hipoxia, esta compuesto por 2 subunidades; HIF-1beta, de expresión constitutiva, y HIF-1alfa, subunidad que en normoxia es reconocida por la E3 ligasa de Ubiquitina VHL para ser degradada por el proteosoma. En hipoxia este reconocimiento no ocurre, HIF-1alfa se estabiliza y HIF-1 aumenta su actividad transcripcional. En trabajos previos demostramos que RSUME, una proteína que es inducida en hipoxia por accion directa de HIF-1, aumenta la estabilidad proteica de HIF-1alfa aumentando consecuentemente la actividad transcripcional de HIF-1. En este trabajo estudiamos los mecanismos moleculares empleados por RSUME para aumentar la actividad transcripcional de HIF-1. En experimentos de transfección transiente, empleando células COS7 y vectores de expresion de RSUME y/o VHL demostramos que RSUME aumenta la estabilidad proteica de HIF-1alfa a pesar de la sobreexpresión de VHL. Consistentemente con estos hallazgos, RSUME aumenta 300% la estabilidad del gen reportero ODD-LUC, en el cual el dominio ODD de HIF-1alfa esta fusionado a la Luciferasa (p<0.05). Utilizando el gen reportero HRE-LUC demostramos que RSUME aumenta 10 veces la actividad transcripcional de HIF-1, y este efecto prevalece sobre el efecto negativo de VHL (p<0.01). Mediante ensayos de Ubiquitinación in vivo e in vitro y detección de proteinas por Western Blot demostramos que RSUME disminuye la ubiquitinación de HIF-1alfa mediada por VHL. Para estudiar los mecanismos por los cuales RSUME es inducido en hipoxia transfectamos una línea celular que carece de VHL con el gen reportero RSUME-LUC y VHL observando que VHL inhibe la expresión de RSUME reconfirmando la participación de HIF-1 en la inducción de RSUME por hipoxia. Concluímos que RSUME inhibe la función de VHL regulando negativamente la ubiquitinación de HIF-1alfa y consecuentemente aumentando su estabilidad proteica, cumpliendo de esta manera un rol muy importante en la respuesta adaptativa a hipoxia.