La sobreexpresión de RSPO3 induce la desregulación de proteínas asociadas a la supervivencia en fibroblastos murinos NIH 3T3.

ZIMBERLIN, M; RUBINSTEIN N; COSO O.,; KORDON E.,

Mar del Plata,

Congreso; Reunión Anual de SAIC 2009; 2009

Soc. Arg Invest. Clinica

Hemos demostrado previamente que la sobre-expresión del gen rspo3 está asociada a la inducción y progresión de tumores mamarios murinos. Además, reportamos que fibroblastos murinos NIH3T3 transfectados en forma estable con un vector de expresión contentiendo el cDNA completo de Rspo3 (línea denominada 3T3-RSPO) son capaces de formar focos de transformación mostrando además niveles elevados de fosforilación de proteínas señalizadoras como AKT y  p38. El objetivo de este trabajo fue avanzar en el análisis de los mecanismos involucrados en la capacidad oncogénica de Rspo3. Primero, se verificó la actividad transformante de este gen al determinarse la mayor capacidad de las 3T3-RSPO comparadas con las NIH3T3 “naif” de formar colonias en agar blando. Además por tinción con el colorante de cristal violeta hallamos que las primeras eran más resistentes a la deprivación de suero, pero que su supervivencia mostraba una disminución significativa en presencia del inhibidor farmacológico LY # 294002 que bloquea la fosforilación de AKT. Para determinar qué proteínas podrían estar asociadas con estos efectos, realizamos ensayos de Western blot y encontramos que las células 3T3-RSPO expresan mayores niveles de Ciclina D1, Bcl-xL (de actividad anti-apoptótica) y menores niveles de las proteínas BAD y BAX (de actividad pro-apoptótica). Además encontramos que el tratamiento con Ly #294002 alteró el el patrón de expresión de miembros de la familia de proteínas Bcl, sugiriendo que la activación de la cascada PI3K/AKT podría estar involucrado en el balance entre proteínas pro y anti-apoptóticas en las 3T3-RSPO. Por lo tanto, estos resultados indican que la sobre-expresión de Rspo3 provoca alteraciones en la expresión de diversas proteínas involucradas en la supervivencia y proliferación celular, lo cual es sin duda relevante en su actividad transformante. Además, hallamos evidencias que al menos parte de los efectos oncogénicos de Rspo3 estarían mediados por la activación de AKT.Palabras clave: RSPO3, supervivencia celular, PI3K/AKTArea temática: Oncología o Transducción de señales