IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación y análisis funcional de los componentes moleculares involucrados en la señalización mediada por CRH en el sistema nervioso central.
Autor/es:
BONFIGLIO J.J.; SENIN, S.; MACCARRONE G.; REWERTS, C.; REFOJO, D.; TURCK, C.; HOLSBOER F.; ARZT, E.; SILBERSTEIN, S.
Lugar:
Mar del Plata - Argentina
Reunión:
Congreso; LIV Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La hormona liberadora de corticotrofina (CRH) juega un rol clave en la respuesta del organismo frente al estrés. La desregulación de la función del receptor de CRH de tipo 1 (CRHR1) en estructuras límbicas se asocia a patologías como depresión/ansiedad. Decidimos caracterizar las vías de señalización de CRH en líneas celulares hipocampales, y  desarrollar estudios orientados a la identificacion de blancos fisiológicos de su acción que podrían ser explotados en el desarrollo de tratamientos farmacológicos para disfunciones de CRH/CRHR1 en el sistema nervioso central (SNC). Para estos estudios, generamos líneas celulares hipocampales (HT22) que expresan CRHR1. En estos clones, CRH activa pERK1/2 mediante Rap1 y PKA (dosis CRH: 50-500 nM; tiempo: 1-60 min). Iniciamos la caracterización del interactoma de B-Raf, la MAPKKK de la cascada B-Raf- MEK1/2-ERK1/2. Coinmunoprecipitados obtenidos con anticuerpos anti-B-Raf se resolvieron por SDS/PAGE. El gel se fraccionó en bandas y las proteinas se analizaron por espectrometría de masa. Obtuvimos un amplio panorama del interactoma de la quinasa en estado basal. Entre las proteínas identificadas al momento se incluyen numerosos componentes del citoesqueleto, cuya funcion en señalizacion ha sido recientemente reconocida. Algunas de las interacciones detectadas se confirmaron mediante ensayos de coinmunoprecipitacion y Western Blot. Examinamos el efecto de un dominante negativo de 14-3-3s, proteinas adaptadoras muy abundantes en SNC cuya interaccion con B-Raf hemos demostrado en este sistema. Nuestros resultados demuestran que las 14-3-3s son necesarias para la activación de ERK1/2 mediada por CRH en los clones de HT22. Detectamos una activación de tipo bifásica con CRH 100 nM (temprana: 3-5 min, tardia: >20 min) predominantemente extranuclear de esta MAPK. El conjunto de estos estudios aportan a la comprensión de los mecanismos moleculares involucrados en la activación de ERK1/2 mediada por CRH en células hipocampales.