IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de vías de señalización activadas por las variantes normal y mutada del receptor P2X7
Autor/es:
APRILE-GARCIA F, LIBERMAN AC, SENIN S, PAEZ-PEREDA M, STADLER H, ACUÑA M, GEREZ J, REFOJO D, PANHUYSEN M, SILLABER I, STÜHMER W, HOLSBOER F, ARZT E
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIV Reunion Cientifica Anual, Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009
Resumen:
Los receptores P2X7 son canales de calcio activados por ATP conformados por subunidades de dos pasos de membrana que se asocian como homo o heterotrímeros. Su largo dominio citoplasmático, activa una cascada de transducción de señales, que incluye a la MAPK ERK 1/2. Mediante distintos estudios genéticos se encontró que pacientes con trastornos depresivos poseen con una incidencia significativa, una variante polimórfica del gen P2X7, encontrada en el aminoácido 460 (Gln460Arg). El objetivo de este trabajo consiste en investigar cómo estos cambios en la secuencia aminoacídica de P2X7 afectan la función del receptor. Se estudió el ingreso de calcio extracelular por P2X7 en la línea celular HEK293 comparando clones estables para P2X7, para P2X7 con la mutación en Gln460Arg y clones coexpresores de ambas variantes, mediante microscopía de fluorescencia utilizando la técnica de Fluo 4-AM y el rol de la cascada de las MAPK mediante ensayos de Western Blot. Se pudo observar que, en homocigosis, la variante mutada de P2X7 tiene la misma funcionalidad que el receptor WT, es decir, ambas variantes de P2X7 producen un marcado aumento de calcio intracelular (800% respecto a HEK293 parental, p<0,01) al ser activados con BzATP (50 uM), un análogo de ATP, específico para receptores P2X7. Cuando ambas subunidades fueron coexpresadas se produjo una marcada disminución en la entrada de calcio (60% respecto a HEK P2X7-WT, p<0,001). A su vez, células que expresan una sola variante de P2X7 mostraron una marcada activación de la MAPK ERK 1/2, mientras que la activación en células coexpresoras de ambas variantes de P2X7 fue marcadamente menor. Este fenómeno se produjo tanto en células HEK293 sin P2X7 endógeno transfectadas establemente con las subunidades de P2X7, como en células gliales con P2X7 endógeno transfectadas con la variante mutante del receptor. Estos resultados fundamentan el mecanismo de acción en heterocigosis en presencia de la variante mutada de P2X7.