CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA HUMANO BASALES EXPRESAN Y SECRETAN RSPO3.

FELCHER C; TOCCI J; ABBA MC; ACOSTA AG; GODDIO MV; CASTRO OA; KORDON E

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Anual de la SAIC; 2015

210 (323) CÉLULAS DE CÁNCER DE MAMA HUMANO BASALES EXPRESAN Y SECRETAN RSPO3. Carla M Felcher1; Johanna M Tocci1; Martin Abba3; A Gabriela Acosta2; M Victoria Goddio1; Olga A Castro2; Edith C Kordon1 IFIBYNE - UBA - CONICET1 IQUIBICEN - UBA - CONICET2 UNLP - CONICET3R-spondin 3 (Rspo3) es parte de una familia de proteínas secretorias involucradas en desarrollo embrionario, diferenciación celular y enfermedades humanas. Previamente, hallamos que Rspo3 está frecuentemente sobre-expresado en tumores mamarios murinos inducidos por el virus MMTV y detectamos su presencia en líneas celulares tumorales de ratón que no expresan receptores de estrógenos ni progesterona (ER-PR-). Su silenciamiento en las mismas redujo su capacidad migratoria y tumorigénica in vivo, y su agregado al medio de cultivo de células no tumorales indujo la transición epitelio-mesenquimal de éstas. Por lo tanto, postulamos que Rspo3 es un potente oncogén en células mamarias murinas. El objetivo de este trabajo fue analizar la expresión y secreción de Rspo3 en líneas tumorales mamarias humanas. Por análisis de Western Blot (WB), detectamos que las líneas basales (ER-PR-) MDA-MB 231 y Hs578T expresan mayores niveles de Rspo3 en comparación con las células ER+PR+, MCF7 y T47D. Resultados similares fueron obtenidos por análisis de bases de datos a nivel de mRNA. Por otro lado, mediante las técnicas de inmunofluorescencia e inmunohistoquímica en MDA-MB 231, detectamos la presencia de Rspo3 en el citoplasma y en el medio extracelular. Dado que Rspo3 posee regiones de alta afinidad por glicosoaminoglicanos de la membrana y/o matriz extracelular, analizamos la presencia de esta proteína en medios condicionados de células MDA-MB 231 en cultivo, tratadas o no con heparina para verificar tal asociación. Los datos obtenidos por WB confirman el enriquecimiento del medio de cultivo luego del mencionado tratamiento. Además, determinamos por estudios bio-informáticos y tratamiento con la enzima PNGasa, que el Rspo3 secretado estaría glicosilado. Estos resultados indican que las células mamarias humanas expresan niveles detectables de Rspo3 glicosilado, el cual permanecería asociado al microambiente tumoral ejerciendo, posiblemente, un efecto autocrino sobre las mismas.