IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
DISEÑO DE UN PROTOCOLO DE CUANTIFICACIÓN DEL NÚMERO DE COPIAS DEL SATÉLITE SRPC ROEDORES TUCO-TUCOS DEL GÉNERO CTENOMYS (OCTODONTIDAE, RODENTIA) POR LA TÉCNICA DE CINÉTICA DE PCR
Autor/es:
BELLUSCIO P M; ROSSI, S
Lugar:
Pergamino, Pcia. de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXVI Congreso Argentino de Genética; 2007
Resumen:
Las especies de tuco-tucos del grupo Corrientes constituyen un modelo particularmente interesante para estudiar la relación entre la evolución de la secuencia satélite SRPC y la evolución cromosómica. El objetivo de este trabajo es estimar el número de copias de SRPC (ncSRPC) en 14 individuos (10 morfos cromosómicos) de este clado.Estudios preliminares indicaron que el ncSRPC en el grupo Corrientes es relativamente bajo y el rango de variación no sería tan amplio como en el resto del género. Por este motivo, se diseñó un protocolo de cuantificación del ncSRPC de mayor poder resolutivo que los métodos actualmente utilizados (Southern y dot blot), basado en cinética de PCR con SYBR® Green I.El diseño de cebadores degenerados y las condiciones de PCR fueron optimizados para favorecer la representación de la mayor cantidad de variantes intragenómicas de SRPC. El ADN previamente digerido con la enzima PstI, cuyo sitio de reconocimiento no se encuentra en SRPC, resultó ser un mejor sustrato que el ADN sin digerir. Se incluyó una curva de calibración con diluciones del ADN de un mismo individuo y los experimentos fueron repetidos con dos pares de cebadores diferentes para confirmar los resultados. Cada  muestra y cada punto de la curva fueron incluídos por cuadruplicado en una misma placa. La curva de calibración mostró linealidad (r2=0.96) entre la masa, y el producto de SRPC amplificado en un rango de 3,5 órdenes de magnitud. Se diferenciaron 4 grupos en base al desvío estándar de los valores de ncSRPC calculados. En conjunto, este protocolo es lo suficientemente sensible y resolutivo para estimar el número de copias por genoma de una secuencia altamente repetida