IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación y Caracterización de Procesos Tempranos de Endocitosis en Células Cromafines de Ratón
Autor/es:
ANDRÉS PÉREZ BAY; FERNANDO D. MARENGO
Lugar:
Huerta Grande. Córdoba. Argentina.
Reunión:
Taller; X Taller Argentino de Neurociencias; 2008
Institución organizadora:
Taller Argentino de Neurociencias
Resumen:
Utilizando microscopia de epifluorescencia combinada con el fluoróforo FM 1-43 desarrollamos un protocolo que permite cuantificar exocitosis, endocitosis y la fracción de membrana endocitada que se recicla a vesículas liberables en células cromafines de ratón. Utilizando registros de capacitancia otros autores demostraron la existencia de una “endocitosis rápida” que se completa en 20 seg., (Artalejo, 1995) pero poco se sabe sobre el destino de la membrana endocitada por esa vía. Con nuestro protocolo, hemos observado que un estímulo de 30 seg. con K+ 50 mM induce: 1) una exocitosis del ~12% de la superficie de membrana celular, 2) una endocitosis que duplica aproximadamente a la exocitosis y 3) practicamente la mitad de la membrana endocitada es reciclada a vesículas liberables. Al igual que lo observado por Artalejo, nuestra endocitosis es sobrecompensadora, dependiente de PKC, bloqueada por Ba2+, y se completaría en un tiempo similar, ya que el FM 1-43 es retirado al finalizar el estímulo. Por otro lado, un estímulo de 30 seg.  con nicotina 200 mM dispara una endocitosis que sobrecompensa aunque muy levemente a la exocitosis, pero que en cambio se recicla completamente a vesículas liberables.  Esto sugiere que  podrían estar interviniendo mecanismos endocíticos diferentes cuya activación dependa del tipo de estímulo.  Al dejar el FM 1-43 en el baño durante 30 seg. adicionales al estímulo, notamos la existencia de un proceso de exocitosis suplementaria y asincrónico con la estimulación. Dicho proceso balancea el efecto de la sobrecompensación, generando que la exocitosis total sea idéntica a la endocitosis. Esta fracción de membrana exocitada provendría de un “pool” de vesículas preexistentes a las recicladas a consecuencia del estímulo. Se ha propuesto que la "endocitosis rápida" es Ca2+ dependiente y que en particular está asociada a la entrada de Ca2+ por canales tipo L (Rosa et al, 2007). Encontramos evidencias que sugieren que señales de Ca2+ mantenidas, asociadas por ejemplo a la actividad buffer del  retículo endoplásmico,  también podría regular este proceso.