Acople de los canales de calcio tipo P/Q con la exocitosis del pool de vesículas inmediatamente liberable (IRP) en células cromafines de ratón

FERNANDO D. MARENGO

Quilmes. Pcia de Buenos Aires.

Simposio; Simposio “Canales: Estructura y Función". En Workshop 2007 de la Sociedad Argentina de Biofísica sobre “Biofísica de Macromoléculas: Aspectos Estructurales e Implicancias Biológicas y Biotecnológicas”; 2007

Sociedad Argentina de Biofísica

   La exocitosis en células cromafines es disparada por entrada de Ca2+ a través de diversos subtipos de canales voltaje dependientes. Estas células responden a despolarizaciones de corta duración con la fusión del IRP, supuestamente formado por vesículas altamente acopladas a canales de calcio. En nuestro laboratorio investigamos las características y la especificidad de este acoplamiento.  La exocitosis se evaluó por el registro de la capacitancia celular mediante la técnica de patch clamp. El IRP resultó sensible a quelantes rápidos de Ca2+, mientras que el total de vesículas listas para liberarse no distinguió entre buffers rápidos y lentos. Utilizando bloqueantes específicos de subtipos de canales determinamos que si bien en nuestras células la corriente L representa un 50%, no participa significativamente de la liberación de IRP. Por otro lado el bloqueo de los canales P/Q resulta en la supresión del 80% de IRP. Estos resultados fueron confirmados utilizando ratones KO para la subunidad α1A de los canales P/Q: el IRP resultó dramáticamente inferior al de células wild type (31±3 vs. 6±1 fF). Esta disminución no se debió a alteraciones en el número total de vesículas liberables, ni en la capacidad de liberar vesículas frente a estímulos potentes. Finalmente por medio de la aplicación de trenes de estimulación, hemos encontrado que mientras las células wild type muestran una fase exocitótica temprana sincrónica y una retrasada asincrónica, en las KO desaparece la fase temprana y prevalece la fase tardía. Finalmente tenemos experimentos preliminares que muestran que células transfectadas con la secuencia synprint (región del canal de calcio que interacciona con proteínas exocitóticas) presentan un IRP marcadamente disminuido. Estos resultados indican que mientras los canales P/Q están específicamente acoplados  al IRP, los otros canales de calcio participarían de la exocitosis de las vesículas más distantes.