IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Ensayos funcionales de una variante de secuencia en una región regulatoria de la transcripción distal del gen CYP21A2.
Autor/es:
BRUQUE, C; FERNANDEZ, C; PECCI, A.; DAIN, L
Lugar:
mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVIII Reunion Anual de SAIC; 2013
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Alrededor del 95% de los casos de Hiperplasia Suprarrenal Congénita se deben a la deficiencia de la enzima 21-hidroxilasa. En trabajos previos describimos la existencia de una variante A>G en una región regulatoria del gen CYP21A2 en tres pacientes con la deficiencia. Mediante ensayos funcionales in vitro demostramos que dicha variante provoca una disminución en la expresión del gen. Asimismo análisis bioinformáticos indicarían un posible sitio de unión para el receptor de Glucocorticoides (GR) en presencia de la variante hallada. El objetivo de este trabajo es iniciar el estudio de los factores involucrados en la disminución de la expresión observada. Se transfectaron 2 líneas celulares de origen adrenal H295R y Y1 con 3 vectores conteniendo: 1-la región promotora minima (P), 2-la secuencia regulatoria salvaje (A) y 3-la secuencia regulatoria mutada (G) clonadas río arriba del gen de luciferasa. Las células fueron cultivadas en presencia de suero entero (Se) o delipidado (Sd), o bien con 10-8 y 10-7 de dexametasona (DEX) o 10-8 y 10-9 de cortisol (C) en Sd. Luego de 48 se midió la actividad de luciferasa. Resultados preliminares (n=2) con Sd mostraron en ambas líneas celulares una disminución en la expresión de luciferasa del vector conteniendo tanto la región regulatoria salvaje como la mutada (valores relativos de expresión ± SEM (H295R): Se P:0,018±0,001; A:1±0024; G:0,46±0,016. Sd P:0,011±0,001; A:0,235±0,011; G:0,148±0,005; p