Transferencia de canales de calcio por medio de vectores ampliación derivados del virus del herpes simple tipo I

IBAÑEZ, L. I.; EPSTEIN, A.; UCHITEL, O. D.

Los Cocos, Córdoba, Argentina

Congreso; XXI Reunión annual; 2006

Abstract Los canales de calcio dependientes de voltaje controlan la mayoría de los procesos dependientes de calcio en la célula, incluyendo liberación de neurotransmisor, excitabilidad, plasticidad neuronal, expresión génica dependiente de actividad, sinaptogénesis, diferenciación y supervivencia neuronales. Los canales de tipo P/Q tienen un alto nivel de expresión en terminales presinápticos y están directamente acoplados a la liberación de neurotransmisor. La eliminación de estos canales induce un rápido y progresivo síndrome neurológico caracterizado por pérdida del balance, ataxia y distonía. En el presente trabajo se recupera la expresión de canales de tipo P/Q en animales que carecen del mismo utilizando como herramienta de transferencia génica a vectores amplicón derivados del virus del Herpes Simple tipo I. Los amplicones son vectores defectivos que tienen la ventaja de no poseer genes virales y de permitir que la mayoría del genoma del virus (aproximadamente 150 Kbp) y el volumen de la cápside puedan ser usado para incorporar grandes cantidades de DNA foráneo. La secuencia transgénica clonada en el plásmido amplicón pAEUA-2, codifica para el cDNA del canal de calcio P/Q de humano, variante delta47. Estos plásmidos expresan además el gen de la proteína fluorescente verde (GFP) la cual se utiliza para la determinación de la expresión del plásmido. El análisis de la expresión del transgen se realizó por técnicas de PCR en tiempo real, inmunofluorescencia y western blot. La capacidad de la secuencia clonada para producir corrientes de calcio bloqueables por la toxina w-Aga, específica para canales de calcio de tipo P/Q, se determinó por medio de experimentos de patch clamp en cultivos primarios.