Ensayo en tuco-tucos (Ctenomys, Rodentia) de un método alternativo y simple de obtención y purificación de ADN

ABRUZZESE, G. A.; CARABALLO D A; BELLUSCIO P M; ROSSI M S

Buenos Aires

Congreso; II CongresoLatinoamericano de Mastozoología y XXV Jornadas Argentinas de Mastozoología; 2012

SAREM

Los métodos alternativos de toma de muestras genéticas permiten reducir el estrés y el daño a los animales. No requieren del uso de anestésicos ni presentan riesgo por cortes resultando menos invasivos. En particular en tuco-tucos las fuentes de material genético son obtenidas a partir de falanges de extremidades posteriores o extremos de la cola. Los protocolos de extracción de ADN utilizados usualmente incluyen digestiones de al menos 1 hora con proteinasa K e incluso, en algunos casos, el uso de solventes orgánicos tóxicos. En este trabajo presentamos la puesta a punto y optimización en Ctenomys de un método de extracción de ADN basado en el principio de lisis alcalina, utilizando como fuente bulbos de pelos. Esta técnica de purificación resultó igualmente eficiente que el kit Purelink genomic DNA de Invitrogen, respecto a la cantidad de ensayos de PCR que puede realizarse pero más rápida y económica. La purificación se realizó partiendo de aproximadamente 30 mg de pelos mantenidos en distintas condiciones (temperatura ambiente, 4°C, -20°C y etanol 100%). Se ensayó la extracción hasta un año después de la obtención de las muestras, resultando igualmente óptimas las conservadas a temperatura ambiente y -20°C. El método probó ser adecuado para amplificar en forma eficiente secuencias del principal ADN satélite del genoma de Ctenomys, SRPC (298pb) y del gen mitocondrial COI (775pb). La puesta a punto del gen nuclear von Willebrand factor (675pb) está avanzada. El protocolo presentado se basa en la utilización de pelos como fuente de ADN y en la técnica tradicional de lisis alcalina, pero que no habían sido optimizadas para su utilización en Ctenomys. La técnica de extracción resulta  rápida, simple y poco costosa tanto económicamente como en cuanto al tiempo de extracción y no presenta peligros en cuanto a los materiales utilizados.