Estudio de la dinámica de los factores de transcripción c-jun y c-fos mediante técnicas de microscopía confocal

VINUESA, ANGELES; NAIPAUER, JULIÁN; GUAIMAS, FRANCISCO; DEGESE, SOL; SAPOCHNIK, DAIANA; SORDELLI, ALINA; RABINOVICH, PAULA; COLUCCIO-LESKOW, FEDERICO; JARES-ERIJMAN, E.; COSO, OMAR

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual- Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

SAIC

El comportamiento de las células es muy dinámico ya que existe una comunicación constante entre ellas y el entorno. La transducción de señales externas y su transformación en una respuesta celular involucra numerosos eventos de interacción entre proteínas. Las técnicas más utilizadas para estudiar este fenómeno involucran el desarmado de las células y el estudio por técnicas bioquímicas. Este trabajo pretende estudiar la dinámica de factores de transcipción (colocalización, interacción física directa, etc.) en células intactas. Se fusionaron los factores de transcripción c-Fos y c-Jun, que forman parte del heterodímero AP-1, a las proteinas uorescentes ECFP y EYFP respectivamente. Se estudió su localización subcelular y su dinámica de translocación al núcleo en células NIH 3T3 en condiciones de proliferación, de deprivación de suero y estimulando con PDGF en presencia o ausencia de inhibidores farmacológicos de vías de MAPKs. Además, se utilizaron estos constructos para realizar ensayos de colocalización en un microscopio confocal practicando cuanticación mediante el uso de los coecientes de Manders´ (CMs), los cuales brindan información acerca de la distribución de las proteínas y la variación espacial de la colocalización. Dado que los eventos desencadenados en la transducción de señales involucran numerosas interacciones entre pares de proteínas, creimos necesario contar con una técnica más precisa que la mera colocalización en un compartimento subcelular. Ensayamos la técnica de FLIM - FRET utilizando el par ECFP-c-Fos y EYFP-c-Jun, de conocida y probada interacción como prototipo. Utilizando la cuanticación por CMs y FLIM - FRET estudiamos la dinámica de AP-1 y la inuencia de las vias de MAPKs sobre la misma. Nuestros resultados muestran un efecto diferencial en la inuencia de Erk1/2 y p38 como mediadores de la traslocación al núcleo de c-Fos; lo cual sugiere que, pese a ser ambas Fos-quinasas, tendrían un efecto diferencial sobre su función.