Pérdida de función del receptor P2X7 por heteromerización con la variante polimórfica Gln460Arg

FERNANDO APRILE-GARCIA; ANA C LIBERMAN; SERIGIO SENIN; MARCELO PAEZ PEREDA; H STADLER; MATIAS ACUÑA; E HOIMAN; DAMIAN REFOJO; M MITKOVSKI; M PANHUYSEN; I SILLABER; WALTER STUMER; FLORIAN HOLSBOER; E ARZT

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Cientifica Anual, Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Los receptores P2X7 son canales de calcio cuyas subunidades se asocian en lamembrana celular como homotrímeros. Distintos estudios genéticos demostraron unaasociación significativa entre la presencia de depresión y desorden bipolar enpacientes psiquiátricos y una variante polimórfica del gen P2X7, que modifica elaminoácido 460 (Gln460Arg). En un trabajo anterior demostramos que la variantepolimórfica de P2X7 Gln460Arg disminuye la función del receptor (ingreso de calcioextracelular y la activación de la MAPK ERK 1/2) únicamente cuando es coexpresadacon la variante normal, mientras que la simple expresión de ambas variantes porseparado no modifica su fenotipo. Este trabajo tiene el objetivo de estudiar enprofundidad el mecanismo de los cambios que produce la variante polimórfica deP2X7. La disminución en la entrada de calcio y en la activación de ERK 1/2 en célulascoexpresoras fue revertida mediante el silenciamiento de P2X7-WT o P2X7-Gln460Argempleando siRNAs específicos que permiten discriminar la mutación, recuperándoseen ambos casos la función normal observada en los clones en los cuales solo seexpresa una de las dos variantes. La especificidad de dicho silenciamiento fueconfirmada mediante Real Time-PCR cuantitativa, con primers diseñados paradiferenciar entre ambas variantes de P2X7. Observamos la interacción física entre lassubunidades, WT y mutante, mediante ensayos de co-inmunoprecipitación (en clonescoexpresores de P2X7-WT-STREP y P2X7-Gln460Arg-HIS, para diferenciar ambasproteínas) y FRET (empleando las variantes de P2X7 fusionadas a las proteínasfluorescentes Cerulean y Venus). Estos resultados demuestran la interacción de lasformas mutada y normal, y la estricta dependencia de la presencia de ambas para quese produzca el fenotipo de alteración de la función del receptor P2X7 por heterocigosis.