IFIBYNE   05513
INSTITUTO DE FISIOLOGIA, BIOLOGIA MOLECULAR Y NEUROCIENCIAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Pérdida de función del receptor P2X7 por heteromerización con la variante polimórfica Gln460Arg
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
@font-face { font-family: "Times New Roman"; }@font-face { font-family: "Arial"; }@font-face { font-family: "Lucida Grande"; }@font-face { font-family: "ヒラギノ角ゴ Pro W3"; }p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 12pt; font-family: "Times New Roman"; }h1 { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; text-align: justify; line-height: 200%; page-break-after: avoid; font-size: 12pt; font-family: Times; }p.BalloonText, li.BalloonText, div.BalloonText { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; font-size: 9pt; font-family: "Lucida Grande"; }p.Heading1A, li.Heading1A, div.Heading1A { margin: 0cm 0cm 0.0001pt; text-align: justify; line-height: 200%; page-break-after: avoid; font-size: 12pt; font-family: Times; color: black; font-weight: bold; }div.Section1 { Pérdida de función del receptor P2X7 por heteromerización con la variante polimórfica Gln460Arg   Aprile-Garcia F1, Liberman AC1, Senin S1, Paez-Pereda M2, Stadler H2,3, Acuña M1, Gerez J1, Hoijman E4 Refojo D5, Mitkovski M6 Panhuysen M2, Sillaber I2, Stühmer W6, Holsboer F5, Arzt E1,5.   1 Laboratorio de Fisiología y Biología Molecular, Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular, FCEN, UBA, IFIBYNE-CONICET, Buenos Aires, Argentina. 2 Affectis Pharmaceuticals, Martinsried, Alemania. 3 Stage Cell Therapeutics, Göttingen, Germany 4 Centro de Microscopías Avanzadas, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina 5 Instituto Max Planck de Psiquiatría, Munich, Alemania. 6 Instituto Max Planck de Medicina Experimental, Göttingen, Alemania.    Los receptores P2X7 son canales de calcio cuyas subunidades se asocian en la membrana celular como homotrímeros. Distintos estudios genéticos demostraron una asociación significativa entre la presencia de depresión y desorden bipolar en pacientes psiquiátricos y una variante polimórfica del gen P2X7, que modifica el aminoácido 460 (Gln460Arg). En un trabajo anterior demostramos que la variante polimórfica de P2X7 Gln460Arg disminuye la función del receptor (ingreso de calcio extracelular y la activación de la MAPK ERK 1/2) únicamente cuando es coexpresada con la variante normal, mientras que la simple expresión de ambas variantes por separado no modifica su fenotipo. Este trabajo tiene el objetivo de estudiar en profundidad el mecanismo de los cambios que produce la variante polimórfica de P2X7. La disminución en la entrada de calcio y en la activación de ERK 1/2 en células coexpresoras fue revertida mediante el silenciamiento de P2X7-WT o P2X7-Gln460Arg empleando siRNAs específicos que permiten discriminar la mutación, recuperándose en ambos casos la función normal observada en los clones en los cuales solo se expresa una de las dos variantes. La especificidad de dicho silenciamiento fue confirmada mediante Real Time-PCR cuantitativa, con primers diseñados para diferenciar entre ambas variantes de P2X7. Observamos la interacción física entre las subunidades, WT y mutante, mediante ensayos de co-inmunoprecipitación (en clones coexpresores de P2X7-WT-STREP y P2X7-Gln460Arg-HIS, para diferenciar ambas proteínas) y FRET (empleando las variantes de P2X7 fusionadas a las proteínas fluorescentes Cerulean y Venus). Estos resultados demuestran la interacción de las formas mutada y normal, y la estricta dependencia de la presencia de ambas para que se produzca el fenotipo de alteración de la función del receptor P2X7 por heterocigosis.