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Efecto antiparasítico de la vitamina B12 sobre Trypanosoma cruzi. Frank F.M.a, Ciccarelli A.B.b, Batlle A.b & Lombardo M.E.b,c aDepartamento de Microbiología, Facultad de Medicina y Cátedra de Inmunología, IDEHU (UBA-CONICET), Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA, Buenos Aires, Argentina. bCentro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias, CIPYP (UBA-CONICET), Hospital de Clínicas José de San Martín, UBA, Buenos Aires, Argentina. cDepartamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UBA, Buenos Aires, Argentina. Trypanosoma cruzi requiere compuestos hémicos para su crecimiento, observándose que tanto la falta como la acumulación del hemo son letales. En este trabajo nuestro objetivo fue investigar el efecto in vitro e in vivo de la vitamina B12 (cianocobalamina), un análogo estructural del hemo, sobre el parásito. La actividad anti-T. cruzi se evaluó in vitro sobre epi- tripo- y amastigotes e in vivo sobre ratones infectados con tripomastigotes sanguíneos a los que se les monitorea sobrevida y parasitemia. Se observó una marcada actividad inhibitoria de la vitamina B12 sobre el crecimiento de la forma epimastigote (IC50 2,42 ¡À 0,54 ¦ÌM) y actividad tripanocida sobre el estadio tripomastigote (IC50 9,46 ¡À 1,20¦ÌM); ambas actividades resultaron ser 2,5 a 3 veces mayores a las del benznidazol empleado como droga de referencia. Para el estadio amastigote cultivado en células Vero la actividad inhibitoria fue baja, sin afectar la vitamina B12 a concentraciones de hasta 1,2 mM la viabilidad de la célula huésped. La actividad antiparasítica in vitro resultó ser independiente de la concentración de hemina (0-30 mg/l) agregada al medio de cultivo y manifestó una respuesta dosis-dependiente frente a una segunda administración de vitamina B12. Respecto al mecanismo de acción de la vitamina B12, observamos por citometría de flujo un incremento del estado oxidativo intracelular, generación de anión superóxido y aumento de la actividad de superóxido dismutasa (50 %) y ascorbato peroxidasa (sólo un 20 %) sin modificar la actividad de tripanotiona reductasa. El empleo de un antioxidante como ditiotreitol (0,5-1 mM) o ácido ascórbico (0,5-1,5 mM) potencia hasta casi 10 veces el efecto antiparasítico de la vitamina B12. Con estos resultados postulamos que la cianocobalamina ejerce su acción a través de la reducción del cobalto (Co+++ de la vitamina B12) a Co++ y luego el Co++ reduce a) el O2 a anión superóxido, b) el anión superóxido a peróxido de hidrógeno y c) el peróxido de hidrógeno a radical hidroxilo. En base a estos resultados el efecto conjunto de la vitamina B12 (1,5 mg/Kg.día) y ácido ascórbico 1,5 mg/Kg.día) fue evaluado in vivo sobre ratones infectados con T. cruzi. Los ratones tratados mostraron una sobrevida del 100% y disminución de la parasitemia de hasta el 60% respecto a ratones control infectados no tratados. En conclusión la vitamina B12 actuaría como un generador de especies reactivas de oxígeno y su administración, conjuntamente con un agente reductor, podría tenerse en cuenta para nuevas modalidades terapeúticas a emplear en la enfermedad de Chagas. Trypanosoma cruzi requiere compuestos hémicos para su crecimiento, observándose que tanto la falta como la acumulación del hemo son letales. En este trabajo nuestro objetivo fue investigar el efecto in vitro e in vivo de la vitamina B12 (cianocobalamina), un análogo estructural del hemo, sobre el parásito. La actividad anti-T. cruzi se evaluó in vitro sobre epi- tripo- y amastigotes e in vivo sobre ratones infectados con tripomastigotes sanguíneos a los que se les monitorea sobrevida y parasitemia. Se observó una marcada actividad inhibitoria de la vitamina B12 sobre el crecimiento de la forma epimastigote (IC50 2,42 ¡À 0,54 ¦ÌM) y actividad tripanocida sobre el estadio tripomastigote (IC50 9,46 ¡À 1,20¦ÌM); ambas actividades resultaron ser 2,5 a 3 veces mayores a las del benznidazol empleado como droga de referencia. Para el estadio amastigote cultivado en células Vero la actividad inhibitoria fue baja, sin afectar la vitamina B12 a concentraciones de hasta 1,2 mM la viabilidad de la célula huésped. La actividad antiparasítica in vitro resultó ser independiente de la concentración de hemina (0-30 mg/l) agregada al medio de cultivo y manifestó una respuesta dosis-dependiente frente a una segunda administración de vitamina B12. Respecto al mecanismo de acción de la vitamina B12, observamos por citometría de flujo un incremento del estado oxidativo intracelular, generación de anión superóxido y aumento de la actividad de superóxido dismutasa (50 %) y ascorbato peroxidasa (sólo un 20 %) sin modificar la actividad de tripanotiona reductasa. El empleo de un antioxidante como ditiotreitol (0,5-1 mM) o ácido ascórbico (0,5-1,5 mM) potencia hasta casi 10 veces el efecto antiparasítico de la vitamina B12. Con estos resultados postulamos que la cianocobalamina ejerce su acción a través de la reducción del cobalto (Co+++ de la vitamina B12) a Co++ y luego el Co++ reduce a) el O2 a anión superóxido, b) el anión superóxido a peróxido de hidrógeno y c) el peróxido de hidrógeno a radical hidroxilo. En base a estos resultados el efecto conjunto de la vitamina B12 (1,5 mg/Kg.día) y ácido ascórbico 1,5 mg/Kg.día) fue evaluado in vivo sobre ratones infectados con T. cruzi. Los ratones tratados mostraron una sobrevida del 100% y disminución de la parasitemia de hasta el 60% respecto a ratones control infectados no tratados. En conclusión la vitamina B12 actuaría como un generador de especies reactivas de oxígeno y su administración, conjuntamente con un agente reductor, podría tenerse en cuenta para nuevas modalidades terapeúticas a emplear en la enfermedad de Chagas. Este resumen será presentado en el 13 Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas José de San Martín (24-27 de Agosto de 2010).